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编号:1605159
红细胞贮存时间对脂多糖诱导的中性粒细胞炎症释放的影响
http://www.100md.com 2012年10月17日 中国医药导报 2012年第13期
细胞培养,空白对照,1试剂,2悬浮红细胞上清的制备,3全血中性粒细胞的分离,培养及分组,4细胞因子检测,5统计学方法,2结果,1红细胞上清细胞因子的表达情况,2两组红细胞上清中IL-6水平比较,3两组红细胞
     张莎娜 王海平 曹 惠 王全立

    1.解放军总医院输血科,北京 100853;2.军事医学科学院附属医院输血科,北京 100071

    血液及血液成分在储存过程中会发生损伤,红细胞自身的生化功能及形态也会发生改变。红细胞悬液中的白细胞和血小板会自发的释放许多生物活性物质,多数活性分子会随着贮存时间的延长而浓度升高。白细胞易崩解并释放各种细胞因子(白介素等)。已有临床报道,血液的贮存损伤会对心脏手术患者和创伤患者带来不良的临床效应[1],但由于发生原因复杂、临床表现不明确,目前相关的临床报道仍存在争议。细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的重要因素[2]。中性粒细胞(polymorphonuclear,PMN)是机体内重要的炎症反应细胞[3],为数量最多的白细胞。细菌LPS可以刺激PMN产生多种炎症介质,但对其确切的内在机制了解甚少,为了解大量库存红细胞的输注对受者输血免疫功能的影响,本研究采用体外实验的方法,在LPS的诱导下,观察随红细胞保存时间的延长,对受者PMN炎症释放的作用。现总结报道如下:1材料与方法

    1.1 试剂

    LPS购自Sigma公司(试剂批号:L2880),中性粒细胞分离液购自天津市川页生化制品有限公司,IL-6和TNF-α试剂盒均购自北京欣博盛生物科技有限公司。

    1.2 悬浮红细胞上清的制备

    将制备好的悬浮红细胞于4℃保存,分别于1、21、35 d(D1、D21、D35)无菌条件下取出 30 mL,1 500 r/min 离心 20 min得到上清,再将上清12 500 r/min离心5 min,去除细胞后分装于-20℃冻存待集中测定。

    1.3 全血中性粒细胞的分离、培养及分组

    取9份健康献血者的全血 ......

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