王群茹 蒋明德 吴晓玲 黄 丽 胡晓松 刘 静

    1.成都军区总医院消化内科，四川成都 610083；2.四川省绵阳市第三人民医院消化内科，四川绵阳 621000；3.成都医学院形态学教研室，四川成都 610083；4.成都医学院第一附属医院普外科，四川成都 610500

    溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)属于炎症性肠病的一种，是一种由多因素导致的肠道慢性炎症性疾病，其病因和发病的分子机制尚未完全阐明，故目前对于该病药物保守治疗尚存在分歧，且缺乏有效的预防复发的措施，被世界卫生组织(WHO)确认为现代难治性疾病之一。Toll样受体在基因水平上调控着众多炎症因子的转录，而TLR4-NF-κB介导的信号转导通路在炎症性疾病的发生发展中起着重要作用，本实验采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC模型，观察Toll样受体4(TLR4)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达，探讨UC可能的发病机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组

    健康雌性Balb/c小鼠20只，6～7周龄，体重16～22 g，购自四川实验动物研究所，合格证号SCDY(川)2010-06，称重编号后查随机数字表分为两组：生理盐水对照组(N组)、溃疡性结肠炎模型组(M组)，每组各10只，清洁级实验室饲养。

    1.2 主要试剂

    DSS：美国Sigma公司；兔抗鼠(人)NF-κB p65多克隆抗体，购于美国Abcom公司；兔抗鼠(人)TLR4多克隆抗体，购自北京中杉金桥生物技术有限公司；PV-9001兔超敏二步法免疫组化检测试剂、PV-9003山羊超敏二步法免疫组化检测试剂、DAB显色试剂盒，均为武汉博士德生物工程有限公司产品。将葡聚糖硫酸钠(DSS)溶于三蒸水中，配成5%DSS溶液。

    1.3 方法

    1.3.1 UC动物模型的制备 M组：Balb/c小鼠自由饮用5%DSS溶液7 d，复制小鼠UC模型[1-2]，造模之日起，每天观察小鼠大便性状和便血情况(联苯胺法检测大便隐血)，活动、体重等，模型建立成功的判定标准根据半稀便、腹泻、大便隐血(+)和肉眼血便等症状和形态学改变确定。N组：自由饮用生理盐水7 d。造模7 d后取与M组同水平段的结肠组织。1.3.2结肠组织形态学检测 肉眼观察结肠组织黏膜及浆膜面的变化。取新鲜结肠组织一块，修整后大小约1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm ......