孙东良 张胜强 于灵灵

    河北省唐山市唐海县医院神经外科，河北唐山 063200

    大鼠切除卵巢(OVX)模型与绝经后妇女骨质疏松症最为相似，OVX大鼠由于骨量丢失，椎间盘应力发生变化，从而导致椎间盘退化，但确切的分子机制还不很清楚，因此，本实验建立OVX大鼠OP模型，通过组织学、形态学及相关因子的观察探讨椎间盘退变的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组

    选择健康3月龄雌性SD大鼠30只，体重(210±32)g(河北联合大学实验动物中心，Ⅱ级)。按体重随机分为三组，每组10只，其中，基础对照(BL)组，实验前处死大鼠取标本；去卵巢手术(OVX)组采用10 mL/L戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，在无菌条件下大鼠行背部入路双侧卵巢切除手术；假手术(sham)组大鼠暴露卵巢但不切除。术后3 d每日1次肌注青霉素20万单位/只，所有大鼠在同等条件下饲养，喂养12周后脱颈椎处死，处死前第10天和第4天分别皮下注射盐酸四环素(30 mg/kg)和钙黄绿素(6 mg/kg)。

    1.2 标本处理

    分别按“1.1”中时段对动物进行脱颈椎处死，切开大鼠背部皮肤，锐刀分离所有的软组织，切除棘突、横突等附件组织，切取L2椎体，用低速锯在近端作矢状面剖开骨髓腔，置于10%福尔马林中性缓冲液中准备硬组织切片，L4～5椎体及椎间盘置于10%福尔马林中性缓冲液中准备行HE常规染色、特殊染色及免疫组化。

    1.3 硬组织切片制作

    将刀片和标本块用40%的酒精适当浸润，碳化钨钢刀控制切片速度，用软毛刷和把针将切片放置载玻片展平，用75%酒精将载玻片适当湿润，放置塑料薄膜，酒精纸吸干多余的酒精，推压切片使之进一步平整、贴附，加盖一张载玻片保护首片，置于40℃～50℃烤箱中过夜，次日晨取出，荧光标记切片避光保存，每个标本切3张片，其中，两张进行VonKossa、Gemisa染色，另一张行荧光指标测量，并采用Leica Dmlb2荧光/光学显微镜及LeicaDC300数码摄像系统进行观察并摄取图像。

    1.4 VG特殊染色方法

    组织常规脱蜡至水，采用Weiger铁苏木素染液染5～10 min，稍水洗，1%盐酸酒精迅速分化，流水冲洗数分钟；VanGieson染液染1～2 min，倾去染液直接用95%的酒精急速分化数秒，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

    1.5 椎间盘退变程度评分 ......