梁碧华 李润祥 马少吟 龚业青 李薇 毕超 朱慧兰 广东省广州市皮肤病防治所，广东广州 510095

    CD 20嵌合抗体的构建、表达及纯化的实验研究

    梁碧华 李润祥 马少吟 龚业青 李薇 毕超 朱慧兰 广东省广州市皮肤病防治所，广东广州 510095

    目的构建CD20嵌合抗体，检测其活性并纯化该嵌合抗体。方法从杂交瘤细胞株中分别扩增抗鼠CD20抗体的轻链和重链基因的可变区，并与人的轻链和重链恒定区连接，分别克隆到pTY5真核表达载体，然后共转染293E细胞，通过RT-PCR检测mRNA的转录，夹心ELISA检测抗体表达量，流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合特异性。结果正确扩增得到抗CD20人鼠嵌合抗体的轻链和重链基因片段并成功构建重组真核表达载体pTY5-CD20H和pTY5-CD20L，在293E细胞中进行瞬时表达，RT-PCR显示抗体基因在细胞中进行了成功的转录，ELISA测定抗体表达量在15～24 ng/mL之间，流式检测结果证实细胞上清分泌的抗CD20嵌合抗体可与NS-1细胞株结合，并通过protein A柱亲和层析获取高纯度的抗CD20嵌合抗体。结论成功构建表达抗CD20嵌合抗体的载体，且表达的抗体具有结合活性，为下一步研究慢性荨麻疹的发病机制及治疗打下基础。

    CD20；嵌合抗体；慢性荨麻疹；自身免疫疾病

    CD20抗原是一种B细胞分化抗原，仅位于前B细胞和成熟B细胞，而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达[1]，是B细胞靶向治疗的理想作用位点。抗CD20单克隆抗体(mAb)以B细胞表面分子CD20为靶向，其用于治疗B细胞淋巴瘤已经获得了令人鼓舞的疗效[2]。近年来也越来越多地应用到自身免疫性疾病的治疗，包括慢性荨麻疹(chronic urticaria，CU)的治疗[3]。

    慢性荨麻疹是一种常见皮肤病，目前治疗效果不佳，且其发病机制较为复杂，至今尚未完全清楚[4-8]。虽有研究表明将B细胞靶向治疗应用于慢性荨麻疹具有良好疗效[9-11]，但目前资料有限，对于具体的作用机制尚不清楚。为了寻找更为有效安全的用于治疗慢性荨麻疹的CD20抗体药物，本研究在前期筛选获取抗CD20单克隆细胞株的基础上，拟克隆其重链和轻链的基因片段，构建重组真核表达载体，并最终表达、纯化具有细胞结合活性的抗CD20嵌合抗体，为下一步治疗慢性荨麻疹的研究打下基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    杂交瘤细胞株、TOP10(大肠埃希菌)、293E细胞、NS-1细胞为本实验室保存 ......