董 岩 杨长江 毛应启梁 方 波 马 虹▲

    1.中国医科大学附属第一医院麻醉科，辽宁沈阳 110001；2.复旦大学上海医学院中西医结合系，上海 200032

    血脊髓屏障与血脑屏障相似是由内皮细胞通过紧密连接组成的，外面有星形胶质细胞形成的血管终足包绕，在局部保持了脊髓内环境的稳定[1]。近来的研究表明，血脊髓屏障的破坏与疼痛有密切的关系，在炎性痛及神经痛的动物模型中都发现了血脊髓屏障的破坏[2-3]。骨癌痛作为一种机制独特的疼痛，具有炎性痛和神经痛的成分，但是又不单单是两者的混合。因此，本实验观察了胫骨癌痛模型中血脊髓屏障的状态及作为血脊髓屏障组成部分的星形胶质细胞的激活及形态变化，这一研究有利于揭示癌痛的发生及维持机制，为癌痛的治疗提供新的手段。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组

    雌性Wistar大鼠，购自中国科学院上海实验动物中心。体重70～80 g 10只用于培养腹水瘤；体重160～180 g 69只，随机分为三组，正常组13只(不实施手术)，骨癌痛组28只(胫骨内接种肿瘤细胞)及假手术组28只(胫骨内注射PBS)，其中每组8只进行痛行为学实验，其余按时间点取脊髓腰膨大进行免疫组化实验。动物分笼饲养，12 h/12 h昼夜交替，室温控制在(22±1)℃，自由饮水摄食，在实验环境中适应1周后进行实验。在对动物实施外科手术及进行疼痛研究的实验过程中，严格遵守国际疼痛协会(IASP)有关动物保护的规定。

    1.2 胫骨癌痛模型制作方法

    制作模型应用的肿瘤细胞是来自于Wistar大鼠的Walker 256乳腺癌细胞(购自上海生物医学工程研究所)。复苏腹水瘤细胞，取1 mL(约2×107个细胞/mL)接种至幼年70～80 g雌性Wistar大鼠腹腔内，7～10 d后抽取腹水，离心清洗后以PBS重悬计数，调节细胞浓度至1×107个细胞/mL。腹腔注射10%水合氯醛(4 mL/kg)麻醉160～180 g大鼠，右侧膝关节部备皮，70%酒精消毒皮肤。左手固定膝关节，用7号针头在膝关节髌韧带内侧缘沿胫骨纵轴往胫骨远端钻孔，深约1 cm，然后换用吸有肿瘤细胞的微量进样器，往骨癌痛组大鼠胫骨骨髓腔内注射4 μL肿瘤细胞，假手术组大鼠注射等量PBS，最后均推入2 μL凝胶海绵溶液封口，留针30 s。正常组大鼠不实施手术。癌痛模型以接种肿瘤细胞侧胫骨内出现肿瘤组织为模型成功标准[4]。

    1.3 机械性痛觉超敏测定

    安静环境中 ......