亓英国

    山东省莱芜市人民医院市中分院骨三科，山东莱芜 271100

    褪黑素(melatonin，MT)是一种由松果体分泌的具有多种生物效应的神经内分泌激素，以往多种研究表明其对脊髓损伤具有清除氧自由基、抗炎、减少神经细胞凋亡等脊神经保护作用[1-3]，而对其促进神经系统修复及对神经生长因子(nerve growth factor，NGF)水平影响的相关研究较少。NGF是首个被发现的内源性神经营养因子，由神经细胞和神经胶质细胞分泌，对神经细胞具有强大的修复、保护作用[4]。本研究通过观察MT对脊髓损伤大鼠血清及脊髓内NGF表达水平的影响，探讨MT对损伤脊髓保护作用的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    84只 8～10 周健康成年雄性 SD 大鼠，体重(250±30)g，购自广东省医学实验动物中心[许可证号：SCXK(粤)2011-0004]。

    1.2 试剂与仪器

    MT、苏木精、伊红均购自美国Sigma公司，无水乙醇、10%水合氯醛、大鼠NGF检测酶联免疫吸附法试剂盒、兔抗鼠NGF多克隆抗体、Trizol试剂、DAB试剂均购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，PCR试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司。美国ABI PCR 9700型PCR扩增仪，美国STAT FAX2100全自动酶标仪，北京君意JY025型凝胶紫外分析仪，HPIAS-1000彩色病理图像报告分析系统。

    1.3 脊髓损伤动物模型建立

    依据改良Allen法制作脊髓损伤大鼠模型[5]。腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，T11～13为术区，备皮消毒后做正中纵向切口暴露目标棘突和椎板，咬除椎板暴露脊髓硬膜，范围约0.6 cm×0.3 cm。采用质量为10 g的条形金属重锤于距硬膜2.5 cm处做自由落体运动打击暴露处脊髓形成脊髓急性损伤。以大鼠尾部及下肢出现抽搐、硬膜充血水肿为模型建立成功标准。清洗、消毒后缝合术口。

    1.4 分组及实验方法

    采用随机数字表法将大鼠分为模型对照组(36只)、模型MT组(36只)及假手术组(12只)，模型对照组和模型MT组随机分为A、B、C亚组，各12只。模型对照组和模型MT组依“1.3”法制作模型 ......