不同运动强度影响大鼠脑缺血后神经功能修复机制的研究
局灶,有氧,1材料与方法,1实验动物,2局灶性脑缺血大鼠模型的建立,3运动方式,4神经功能缺失评分,5脑组织标本制作,6透射电镜观察脑缺血对脑组织结构的影响,7脑组织NO含量和NOS活性的测定,8RT-PCR
吴伟奋 陈春美 苏德炎 高松龄 陈庆熙 韦 浩 王春华 杨卫忠1.福建医科大学体育教研部,福建福州 350108;2.福建医科大学附属协和医院神经外科,福建福州 350001
运动疗法在脑梗死、偏瘫康复治疗一直在运动医学界引起广泛关注。前期研究证实,脑梗死后出现的神经功能损失与一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的表达有关[1-2]。研究脑缺血偏瘫机制和治疗的经典动物模型是大鼠局灶性脑缺血模型,本研究采用线栓法闭塞大鼠右侧大脑中动脉法(middle cerebral artery occlusion,MACO)建立局灶性脑缺血大鼠模型,其目的在于探讨有氧运动促进减少神经功能缺失和脑缺血后神经细胞修复的机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
24 只健康成年雄性 SD 大鼠,体重(260±10)g,清洁级,来自浙江省实验动物中心,标准啮齿类饲料饲养且自由饮食,室内温度控制在20~24℃。
1.2 局灶性脑缺血大鼠模型的建立
大鼠分笼饲养,待其适应1周后,腹腔注射麻醉(2%戊巴比妥钠:35 mg/kg),参照Longa等[3]学者应用线栓法闭塞大鼠右侧大脑中动脉建立脑缺血大鼠模型。将其随机分为对照组、疲劳运动组和有氧运动组,各组8只。
1.3 运动方式
有氧运动组和疲劳运动组均采用递增强度方式进行跑台运动,运动负荷参照Bedford等[4]的研究进行,有氧训练组每周5 d,共4周,起始速度为15 m/min,时间为20 min,递增速度3 m/min、时间5 min,运动至速度为20 m/min,时间为60 min后增加跑台坡度5%;疲劳训练组每周6 d,共4周,递增速度3 m/min、时间5 min,运动至速度为35 m/min,时间为(60±10)min后增加跑台坡度10%;对照组正常笼内喂养,不运动。
1.4 神经功能缺失评分
在规定的时间点时对每只大鼠进行神经功能缺失评分,评分参考 Longa等[3]的方法,评分标准是:0分,没有神经损伤症状;1分,不能完全伸展对侧前爪;2分,向外侧(左)转圈;3分,向对侧倾倒;4分,不能自发行走,意识丧失。
1.5 脑组织标本制作
在规定的时间点对每只造模成功的大鼠进行深度麻醉,然后用生理盐水快速冲洗主动脉后,剪开大鼠头部并暴露脑组织,快速把脑组织取出,然后包埋在冰中,在大鼠右侧离额极2.5 mm处(右侧额顶叶背外侧皮质和基底节)向后切取 ......
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