张海燕 刘忠锦 廉 洁 陈志伟

    1.齐齐哈尔医学院组胚教研室，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔医学院第一附属医院，黑龙江齐齐哈尔 161006

    阿尔茨海默病(AD)是一种多病因产生的渐进性脑功能障碍疾病。主要是在大脑海马区域出现淀粉样物质，即淀粉样β蛋白(amyloidβprotein，Aβ)，Aβ可以使组织产生大量自由基，干扰钙离子代谢，胆碱能系统损伤，从而引起脑神经元发生改变[1-2]。衡量胆碱能神经元功能的标志是乙酰胆碱转移酶(CHAT)，它是乙酰胆碱(ACh)生物合成的关键酶。本研究观察侧脑室注射Aβ1-40所致AD模型大鼠的脑内胆碱能系统中乙酰胆碱酯酶(AchE)及CHAT的影响，对AD的药物研发提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物及分组 清洁级健康Wistar大鼠48只，雄性，体重(250±50)g，白求恩医大实验动物中心提供，合格证号2010002，经水迷宫测试筛选48只，随机分为4组：正常组、模型组、加兰他敏组和电针组，正常组常规饮水和饲料。其余3组大鼠均注射β-淀粉样肽(1-40)(Aβ1-40)所致AD模型，模型组造模后不治疗。加兰他敏组采用氢溴酸加兰他敏灌胃0.5～1 mg/(kg·d)，治疗4周。参照实验针灸学[3]，电针组针刺百会、双肾俞、双足三里、大椎等穴治疗，用0.25mm×0.25mm华佗牌无菌毫针针刺，连接DJ-6805型脉冲电针仪，电压为2 V，频率为20 Hz，强度以肢体局部轻微颤动为度，持续刺激20 min，每日1次，连续治疗4周。

    1.1.2 主要试剂和仪器 氢溴酸加兰他敏(陕西森弗生物技术有限公司)，Aβ1-40(Sigma公司)，AchE、CHAT免疫组化检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，AchE及CHAT测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、脑立体定位仪、水迷宫、DJ-6805型脉冲电针仪，Olympus显微镜。

    1.2 方法

    1.2.1 模型复制 10%水合氯醛4 mL/kg麻醉大鼠，在头部做正中矢状切口，坐标为脑表面下3.5mm，前囟1.5mm，矢状缝左右旁开1.5mm。在每侧侧脑室注射，缓慢注入二甲亚砜孵育72 h后的聚集态Aβ1-40(5μg/μL)各2μL ......