张阵阵 栾 洁 汪家春 储智勇

    海军医学研究所，上海 200433

    虫草属Cordyceps (Fr.)Link 是一大类昆虫病原真菌，其特定的菌感染特定的昆虫后才成为具有重要的药用价值的冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]，该属伪品种类繁多，品质高低各异[1]。 虫草属的种质资源丰富，属间物种的形态极其相似， 但仅有蝙蝠蛾科虫草为 《中国药典》2010 年版规定的冬虫夏草。 现代药理药效学研究显示，蝙蝠蛾科虫草对吞噬肿瘤细胞的能力是硒的4 倍，所含的虫草素能明显增强红细胞黏附肿瘤细胞的能力，抑制肿瘤生长和转移，明显提升白细胞和血小板的数量，可辅助治疗鼻咽癌、肺癌、白血病、脑癌等恶性肿瘤；减轻组织水肿，可多用于脑水肿的辅助治疗， 防治急性肾功能衰竭等疾病，预防和控制慢性支气管炎、肺源性心脏病，迅速改善放、化疗后的呕吐恶心、头发脱落、失眠等症状。 另外，蝙蝠蛾科虫草所含的特有成分虫草多糖为免疫调节剂，临床治疗及保健用途广泛。 在美国，因其对于恶性肿瘤预防控制的特殊贡献，已将其列为抗肿瘤新药，目前已进入临床三期的研究[2-3]。

    因受自然条件的限制，天然蝙蝠蛾科虫草资源日益紧缺，价格昂贵，一些不法分子利用劣质或亚香棒虫草代替蝙蝠蛾科虫草， 其治疗效果受到伪品及劣质品严重影响，甚至对人体产生毒副作用，鉴别和评价同属不同科的虫草显得尤为重要[4]。 目前，其检测方法多为生药学鉴定，薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等主要化学方法鉴定，分子水平鉴定也开始进行[5-8]。

    药用真菌虫草属的DNA 指纹图谱检测方法中所采用的放射显带方法和荧光显带方法具有一定的局限性，放射显带方法对环境和实验人员均有高污染的风险，而荧光显带方法所需要的仪器昂贵，难以普及。 另外，低污染而应用普遍的传统聚丙烯凝胶电泳银染显带方法操作时间长、步骤多，采用试剂繁多，易造成显带背景颜色浓、分辨率低、条带模糊的情况，导致显带结果不准确。本文分别对虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶终浓度、胶电泳步骤、胶固定方案、胶染色方法、胶显色步骤进行分析，确定利于虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶DNA 多态性展现的方案， 现报道如下：

    1 材料与仪器

    1.1 材料

    虫草属Cordyceps(Fr.)Link 样品由海军医学研究所汪家春副研究员鉴定。 丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、过硫酸胺、TEMED 购自Takara 生物公司；尿素(Urea)购自Sigma 公司；硝酸银、剥离硅烷、亲和硅烷购自北京鼎国生物工程公司；引物、接头由上海生物工程技术服务有限公司完成；其余试剂均为国产分析纯 ......