陈 文 李 蕾 陈国千

    南京医科大学附属无锡市人民医院检验科，江苏无锡 214023

    膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其绝大多数为移行细胞癌。膀胱癌目前以手术治疗为主，但五年生存率低。慢性感染和炎症被认为是肿瘤发生、发展极为重要的原因之一。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为一种核内DNA结合蛋白，可以分泌到胞外并介导炎性反应，是一种重要的晚期促炎症因子[1]。研究显示，HMGB1的高表达与肿瘤细胞增殖、浸润、转移以及患者预后等关系密切[2]。最近研究表明，HMGB1在膀胱癌组织中高表达，且与肿瘤的分级、分期及患者预后相关[3-4]。脂多糖(LPS)可以诱导单核细胞、巨噬细胞等主动释放HMGB1到胞外[5-6]。LPS对膀胱癌细胞诱导HMGB1释放作用尚未见研究报道，本研究旨在观察LPS对膀胱癌细胞释放HMGB1的影响，并探讨其相关信号通路机制，为阐明疾病治疗新途径提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    人膀胱移行细胞癌细胞株T24购自中国科学院细胞库；RPMI-1640培养液、OPTI-MEM I培养液购自美国Gibco公司；LPS、LY294002 购自美国 Sigma公司，HMGB1 ELISA试剂盒购自日本Shino-Test公司；Trizol、 逆转录试剂盒及实时荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司。HMGB1、GAPDH引物由日本TaKaRa公司合成。

    1.2 细胞培养

    使用含 10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素、2 mmol/L谷氨酰胺的RPMI-1640培养液，将人膀胱癌细胞株T24置于5%CO2培养箱中培养，至细胞达到对数生长期时，换用无血清OPTI-MEM I培养液。首先经预实验筛选出LPS的合适浓度和LY294002的不同浓度及检测培养上清液中HMGB1含量的最佳时间。选择100 μg/L LPS为作用浓度。只加OPTI-MEM I培养液组为对照组，加含100 μg/L LPS培养液组为LPS诱导组，并于LPS诱导6、12、18、24 h检测培养上清液中HMGB1浓度和细胞HMGB1 mRNA表达水平 ......