董 洋 郝 林 张治国 韩从辉,▲

    1.东南大学临床医学院，江苏南京 210009；2.江苏省徐州市中心医院泌尿外科，江苏徐州 221009

    缺血再灌注(IR)损伤是指组织或器官缺血后重获血流灌注或氧供，组织或器官损伤反而加重的现象。临床上肾IR是肾移植中不可避免的损伤之一，如何有效地预防和减轻IR损伤一直受到广泛重视[1-2]。有研究表明，输尿管结扎(UO)预适应可有效减轻肾脏IR损伤，但其具体机制尚不明确[3]。热休克蛋白27(HSP27)作为一种有效的抗细胞凋亡蛋白，能减少细胞坏死，在稳定纤维型肌动蛋白细胞骨架中发挥重要作用[4]。本研究旨在运用野生型小鼠和肾内靶向抑制HSP27表达的小鼠，通过建立小鼠肾脏UO及IR模型，探讨HSP27在UO减轻肾IR损伤中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与主要试剂

    1.1.1 实验动物 8～10周龄雄性C57BL/6小鼠，体重23～28 g，无固定病原体级，购自中国科学院上海实验动物中心，自由进食、饮水，于清洁环境下昼夜各12 h规律饲养。

    1.1.2 实验试剂 包装有干扰HSP27表达的短发夹RNA的重组腺病毒购于Invitrogen公司；抗HSP27抗体(1∶500稀释)购于 Cell Signaling Technology公司；抗肌动蛋白(βactin)抗体购于Santa Cruz Biotechnology公司；聚合酶链反应(PCR)引物购于TaKaRa公司；胱天蛋白酶3活性检测试剂盒购于上海碧云天公司。

    1.2 模型制备

    1.2.1 输尿管结扎预适应(UO)24 h模型制备 参阅已有的UO模型基础[2]，笔者进行了改进。小鼠于腹腔注射戊巴比妥钠，短暂麻醉后，常规消毒皮肤，取下腹部正中切口，暴露左侧肾脏及输尿管，确认输尿管后，沿输尿管于距肾盂1 cm用7-0丝线打一活结，结扎输尿管，右侧输尿管不做处理，丝线的另一端待缝合切口时埋于皮下，24 h后松掉7-0丝线，使输尿管再通。

    1.2.2 肾脏缺血再灌注损伤(IR)模型制备 小鼠输尿管再通后48 h进行IR处理。使用戊巴比妥钠(60 mg/kg)腹腔注射麻醉小鼠，用AIT-HTP动物恒温维持系统(上海奥尔科特生物科技有限公司)维持小鼠体温在36℃左右，腹正中线开腹，切除右肾，游离左侧肾蒂，无损伤动脉夹毕左侧肾蒂25 min ......