黄新宇 杨远良 许国华 容锡沧 冯瑞强

    1.广东省江门市人民医院骨科，广东江门 529000；2.广州市番禺区中心医院骨一科，广东广州 511400

    前列腺癌发病率居美国男性恶性肿瘤中第一位[1]，每年因前列腺癌死亡的患者数仅次于肺癌居第二位，其发病率在我国也呈逐年升高趋势。前列腺癌最易发生骨转移，85%～100%死于前列腺癌的患者中合并骨转移[2]。发生骨转移后临床上缺乏有效的治疗手段，其确切转移机制目前也不十分清楚[3-4]。因此，探寻新的治疗前列腺癌骨转移的方式及药物很有必要。硫化氢(hydrogen sulfide，H2S)是一种能溶于水有臭鸡蛋气味的气体，作为一种气体信号分子受到越来越广泛的研究[5]。在哺乳动物、鱼类乃至无脊椎动物体内，都可以生成内源性H2S气体，发挥类似神经递质的中枢调节作用。H2S发挥生物学效应的重要机制是调节细胞的增殖和凋亡[6-7]，Li等[8]报道硫化氢促进恶性胶质瘤的生长，Cao等[9]报道硫化氢导致胰腺腺癌细胞凋亡。目前的研究发现，释放硫化氢的非甾体抗炎药提高其对前列腺癌细胞的抗癌作用[10]，但机制还不太明确。本试验以硫氢化钠(sodium hydrosulfide，NaHS)作为硫化氢的供体，探讨硫化氢对前列腺癌骨转移PC-3细胞生长、侵袭的影响，并初步探讨其可能的机制。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    NaHS购自Sigma公司；cck-8购自同仁公司；胎牛血清购自Gibco公司；抗 Bcl-2、抗 Bax和 Western-Blot检测试剂盒购自Cell Signaling Technology Inc。细胞蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。

    1.2 细胞培养

    前列腺癌细胞系PC-3购自ATCC，细胞置于含10%胎牛血清F-12培养基中，于37℃、5%CO2条件培养，取对数生长期细胞进行试验。

    1.3 细胞存活率的检测

    根据 NaHS浓度将实验分为 0、1、2、4 mmol/L四组，每组均作用PC-3细胞36 h，检测不同浓度下细胞存活率。取对数生长期细胞，以10 000个/孔接种于96孔板，37℃、5%CO2条件下培养过夜待细胞贴壁，用含有不同处理因素的培养基培养细胞，每组设5个复孔。处理结束后加入CCK-8(每孔 100 μL 加 10 μL CCK-8)，轻摇，37℃孵育 4 h，然后用酶联免疫检测仪测定每孔在450 nm波长处的吸光度(OD)。取5孔OD值的平均值 ......