蒋曦媛 陆玉凤 刘丽艳 余江毅

    1.南京中医药大学附属昆山市中医医院内分泌科，江苏昆山 215300；2.江苏省中医院 南京中医药大学附属医院内分泌科，江苏南京 210029

    米格列奈于1992年由Sato等首次合成，是继瑞格列奈和那格列奈后的第3个新型苯甲酸衍生物类降糖药[1]。其不仅具有速效、强效、短效降糖的特点，同时还有改善胰岛素抵抗、抗炎及抗氧化应激等作用[2-3]。有研究表明，糖尿病慢性并发症的发生与血管内皮功能紊乱关系密切[4]。本研究通过观察米格列奈对高糖环境下内皮细胞一氧化氮(NO)合成及氧化应激的影响，从而进一步探讨米格列奈对高糖环境下人主动脉内皮细胞(HAEC)活性的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    HAEC及内皮细胞培养基购自于美国ScienCell研究实验室(ScienCell 6100)。胎牛血清购自于杭州四季青生物工程材料研究所。人NO、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)ELISA检测试剂盒购自于美国R and D公司。超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测试盒购自于南京建成生物工程研究所。

    1.2 方法

    1.2.1 分组 分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30 mmol/L)、米格列奈组(30 mmol/L葡萄糖浓度+10 μmol/L米格列奈)。

    1.2.2 细胞培养HAEC在含10%胎牛血清的培养瓶中常规培养，条件为：5%CO237℃。在HAECs达80%左右融合时用含2%马血清的DMEM培养液诱导分化成为成熟HAEC。

    1.2.3 一氧化氮及一氧化氮合酶测定 按说明书制成浓度分为 12.5、25、50、100、200 μmol/L 的标准品稀释液，分别设空白孔、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔加入稀释好的标准液50 μL；在酶标包被板上待测样品孔内先加样品稀释液40 μL，然后再加待测样品10 μL(样品最终稀释度为5倍)。轻轻晃动混匀，37℃温育30 min。弃液甩干后每孔加入酶标试剂50 μL，空白孔除外。轻轻晃动摇匀，37℃温育30 min。再次弃液甩干，加入显色剂A 50 μL，再加入显色剂 B 50 μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10 min。取出酶标板，每孔加终止液50 μL，终止反应。以空白孔调零，在450 nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。根据标准曲线计算出对应样品浓度。

    1.2.4 超氧化物歧化酶的检测 取细胞培养液 ......