黄秀芳 原向伟

    1.广东省江门市中心医院病理科，广东江门 529030；2.广东省江门市中心医院骨科，广东江门 529030

    骨肉瘤高发于青少年人群，居于人类骨骼系统恶性肿瘤发病率第1 位，其恶性程度高，发展快，许多患者在发现时已存在肺转移，因此疗效不佳。 目前主要治疗方法包括新辅助化疗+外科手术包括保肢或截肢手术，但能否手术及保证手术效果的重要前提是化疗有效。临床上相当患者因为化疗耐药或毒副作用大等问题，引起化疗失败，导致患者无法行保肢手术从而截肢，甚至无法手术而导致死亡[1]。 因此，提高化疗疗效对于骨肉瘤的治疗来讲具有重大意义。IFN-α 属于Ⅰ型干扰素，具有调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学作用[2]，IFN-α 可直接抑制耐药骨肉瘤细胞的生长[3]，然而其对骨肉瘤化疗敏感性的影响目前尚不清楚。因此笔者联合使用IFN-α 与依托泊苷(Etoposide)处理人骨肉瘤U2OS 和MG63 细胞，探讨其对两种细胞生长抑制和凋亡的影响，并研究其分子机制，以期为提高骨肉瘤对化疗药物敏感性提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养

    人骨肉瘤细胞U2OS(p53 基因野生型)和MG63(p53 基因突变型)购自中山大学病理教研室，培养液为DMEM(GIBCO 产品)，其中含10%胎牛血清(GIBCO 产品)、100 U/mL 青霉素和100 μg/mL 链霉素，培养于37℃的5%CO2培养箱(Forma，美国)。

    1.2 药物处理

    IFN-α 购自Peprotech 公司， 批号300-02A，Etoposide 购自Sigma 公司， 批号E1383， 稀释分装冻存-20℃， 使用时采用DMEM 培养液稀释成工作浓度，处理分为四组：对照组(加入与等量于其余组的DMEM 培养液)、IFN-α (加入含工作浓度药物的DMEM 培养液使终浓度为5000 U/mL) 组，Etoposide(终浓 度 在U2OS 细 胞 为2.5 μg/mL、MG63 细 胞 为0.625 μg/mL)组和IFN-α+Etoposide(终浓度同上)组。

    1.3 流式细胞术检测

    细胞经处理后， 消化离心， 收集细胞；PBS 洗两次，离心；70%乙醇固定过夜；细胞经10 μmol/L 的碘化丙啶(PI)染色5 min，4℃避光30 min；上FCM 流式细胞仪(BD，美国)用488 nm 激发光检测细胞DNA含量，LYSIS 软件分析凋亡率 ......