李 明 谭诗云

    武汉大学人民医院消化内科，湖北武汉 430060

    研究表明，非甾体类消炎药(non-steroid anti-in-flammatory drugs，NSAIDs)能降低结肠癌的发生，减少家族性结肠息肉患者息肉数量和大小，并能预防结肠腺瘤的复发[1]。本室前期研究显示[2]乙酰水杨酸能抑制结肠癌细胞系环氧合酶-2(COX-2)表达而抑制生长，并诱导细胞凋亡。 但临床研究表明长期应用NSAIDs可引起胃溃疡甚至胃出血及一系列心血管不良反应，限制了其在临床上的广泛应用。 因此寻找毒性小，而又能有效的抑制COX-2 的抑制剂， 是大肠癌化学预防的重要课题。

    丹皮酚具有与非甾体类抗炎药相似的药理作用，包括解热镇痛、抗炎、免疫调节、抑制血小板聚集、抗血栓形成和中枢抑制作用等，且其副作用小。 课题组前期[3-5]观察了丹皮酚对大肠癌HT-29 细胞凋亡及凋亡相关基因的影响，发现丹皮酚可抑制大肠癌细胞的增殖生长， 调节凋亡相关基因如Bcl-2、Bax、Fas 及p53 等的表达，且丹皮酚能够影响肿瘤细胞的生长周期，并与5-Fu 具有协同作用。丹皮酚与非甾体类抗炎药均能有效下调COX-2 的表达量， 从而发挥抗肿瘤作用。本研究在此基础上进一步探讨了丹皮酚对人结肠癌LoVo 细胞内Ca2+含量及RUNX-3 基因的影响。

    1 资料与方法

    1.1 细胞及试剂

    人结肠癌细胞系LoVo 细胞购于中国科学院上海细胞库； 丹皮酚注射液购于宁波天真制药有限公司，纯度≥99.9%；AnnexinV/PI 试剂盒购于BENDER 公司；CCK-8 试剂盒购自碧云天生物技术研究所；胎牛血清、DMEM/F12 培养基、DEPC 购于杭州四季青生物材料研究所；Fluo-3/AM 购于日本同仁化学研究所；Trizol 试剂、DEPC、异丙醇、氯仿、RT-PCR 试剂盒等购于武汉谷歌生物技术有限公司；RUNX-3 单克隆抗体购自Cell Signaling Technology 公司；辣根酶标记兔抗山羊IgG 购自武汉博士德生物科技有限公司。

    1.2 细胞培养

    LoVo 细胞培养于含10%小牛血清的DMEM/F12培养液中，置于37℃，饱和湿度，5%CO2培养箱培养，每2～3 天传代1 次，取对数生长期细胞用于实验。

    1.3 CCK-8 比色法检测丹皮酚对LoVo 细胞活力的影响

    取对数生长期的LoVo 细胞，以5×104/mL 的浓度接种于96 孔板 ......