李 丰 王炜 姜开文 张隆鑫

    广州医科大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510000

    大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及相关性研究

    李 丰 王炜▲姜开文 张隆鑫

    广州医科大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510000

    目的探讨大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及其二者的相互关系。方法随机将100只SD大鼠分为模型组与对照组各50只，模型组大鼠给予0.01%DEN自由饮用18周诱导大鼠肝癌模型，对照组大鼠常规自由饮水，于4、8、12、16、18周分别处死模型组10只，对照组10只。采用免疫组化、RT-PCR、Western bolt法检测survivin和livin的表达。结果免疫组化结果显示：模型组大鼠survivin、livin表达总阳性率分别为82%(41/ 50)、86%(43/50)，survivin与livin都表达于肝癌组织及癌旁肝组织中，且二者的表达重叠，Spearman相关分析表明，二者的表达有相关性(r=0.9027，P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物及建模健康清洁级雄性SD大鼠100只(190～200 g)，购自中山大学医学院动物中心，饲养于普通级实验室，标准饲料喂养。随机分为模型组、对照组，各50只。模型组大鼠0.01%DEN(饮用蒸馏水配制，Sigma公司产品，纯度为99.9%)自由饮水18周[3]建立大鼠肝癌模型。对照组大鼠常规自由饮水。分别在4、8、12、16、18周处死模型组、对照组大鼠各10只。取左肝迅速进行液氮冷冻后放入-80℃冰箱以备行Western bolt、RT-PCR检测，右肝进行固定、脱水透明、常规包埋，行免疫组织化学检测。

    1.1.2 试剂兔抗鼠livin抗体购自Sigma公司；兔抗鼠survivin抗体购自Abcam公司；Trizol购自Invitrogen公司；即用型SP试剂盒、DAB购自福建迈新生物制剂有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 病理学检查标本常规石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色观察肝癌病变过程。

    1.2.2 免疫组织化学法切片脱蜡、水化，3%H2O2孵育后高压修复，兔抗livin、兔抗survivin作为一抗；应用SP免疫组织化学染色技术进行染色，DAB显色，苏木素复染。染色中以PBS代替一抗做空白对照，未见非特异性染色。

    1.2.3 Western blot法冰浴上(4℃)将肝组织剪碎，匀浆，超声破碎后 ......