张江国 龚凤云 李 玲 宋建新▲

    1.华中科技大学附属同济医院感染科，湖北武汉 430030；2.武汉市普爱医院，湖北武汉 430030

    中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)是脂质运载蛋白家族中的一个新成员，最初被发现能结合细菌铁载体进而阻止铁元素吸收入细菌从而抑制细菌活性[1]。近几年，有学者发现高剂量腹腔内注射能引起肾小管坏死的顺铂，能快速诱导肾脏NGAL 的表达及从肾小管细胞释放[2]。 也有学者报道指出肾小管在短时间缺血损伤后肾小管会高表达NGAL[3]。 肾脏NGAL 的表达是肾移植时肾脏缺血损伤的早期指标[4]。 肝硬化时肾功能受损及肝肾综合征时，血和尿中NGAL 表达增多是肾功能受损的敏感指标[5-6]。但是在肝硬化肾功能受损时，NGAL 在肾脏的表达及与肾功能受损之间的关系还不是很清楚，因此本研究初步研究了大鼠肝硬化模型中肾脏NGAL 的表达与肾功能损害之间的关系。这将为肾脏NGAL 表达变化与肝硬化肾脏损伤之间的关系提供直接的证据。

    1 材料与方法

    1.1 材料及试剂

    雄性SD 大鼠60 只，SPF 级，体重150～200 g，购于自湖北省实验动物中心，饲养于同济医院实验动物中心SPF 级屏障环境。四氯化碳购自天津德恩化学试剂有限公司，免疫组化及Western blot NGAL 一抗购自美国Abnova 公司，免疫组化二抗试剂盒购自上海基因科技有限公司，Western blot 二抗及配胶、转膜、显影试剂购自武汉谷歌生物科技有限公司。

    1.2 模型制作

    重量大于200 g 的SD 大鼠，标准饲料喂养，其中5 只SD 雄性大鼠作为空白对照，55 只SD 雄性大鼠持续使用无菌无热原灌胃针经胃给四氯化碳，首次剂量为20 μL，后续计量根据上次剂量灌胃后48 h 体重变化调整。 等腹水出现后，四氯化碳剂量减至20 μL，12～16 周后，肝硬化腹水模型建立[7]。

    1.3 免疫组化法测定肾脏NGAL 表达

    收集的大鼠肾脏标本首先经过10%的甲醛固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、脱蜡、水化、抗原修复、NGAL 一抗4℃冰箱过夜、二抗37℃孵育10 min、DAB 显色、PBS 终止染色、封片等 ......