李富琴 申玉红 冯杏琳 张 敏 申 华

    河南省开封市妇产医院，河南开封 475000

    习惯性流产(habitual abortion，HA)是妇产科常见的一种疾病，发病主要与母体生殖道异常、母体内分泌异常、染色体异常、生殖道感染、宫颈功能不全及免疫功能异常等有关，约50%的HA 病因不明[1]。随着人们对疾病的免疫学发病机制研究的不断深入，尤其是对辅助性T 细胞的深入研究，国外学者发现，T 细胞亚群分化失衡与HA 密切相关，且受到相关转录因子的调控[2]。 同时，环境因素也不容忽视，如吸烟[3]、饮酒[4]、家族史[5]、体重指数(BMI)[6]等。 本研究以50 例HA 非孕期患者和50 例正常非孕妇女为研究对象，采用问卷调查、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(RTQ-PCR)等技术，统计分析问卷调查结果，测定患者外周血Th1，Th2，Th17 的百分比， 细胞因子IFN-γ、IL-4 和IL-17 的表达水平及相关转录因子T-bet、GATA-3 和STAT-3 mRNA 的含量。 旨在探讨HA 患者Th1、Th2、Th17 细胞变化及环境因素与HA的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    选择2011 年6 月～2012 年9 月河南省开封市妇产医院就诊的50 例非孕期HA 患者(HA 组)，以及同期50 例健康非孕期妇女 (NNP 组)。 HA 组纳入标准：①年龄20～40 岁；②有两次或两次以上自然流产史；③无糖尿病、高血压、生殖器畸形等器质性疾病。NNP 组纳入标准：①年龄21～40 岁；②与HA 组无血缘关系；③无自然流产史，无肾炎、肝病、生殖器感染等病史。 所有研究对象均知情同意并签署知情同意。

    1.2 主要试剂和仪器

    莫能霉素、离子霉素和PMA 购自Takara 公司，RPMI-1640、小牛血清购自Sigma 公司，TapDNA 聚合酶购自北京天根公司，ELISA 检测试剂盒购自上海生工，流式细胞仪购自美国Guava。

    1.3 方法

    1.3.1 分离和体外培养PBMC 采集患者抗凝静脉血5 mL，收集其中的单个核细胞层，加入PBS 3 mL，1200 r/min离心洗涤10 min，弃上清。 用含10%胎牛血清的RPMI1640 培养基重悬 ......