成炳祥 方 煊 朱承良 秦运升 庄 莉

    1.浙江省绍兴第二医院外科，浙江绍兴 312000；2.浙江大学医学院附属第一医院肝胆外科，浙江杭州 310003

    肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其进展迅速，对放化疗不敏感，手术切除后易转移复发，因而在我国恶性肿瘤的病死率中，肝癌占第2 位[1]。索拉菲尼是一种新型的口服多激酶抑制剂，其通过对Raf/丝裂原活性蛋白激酶/细胞外信号转导通路(Raf/MEK/ERK)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1，2，3 等通路的抑制调控，从而发挥抑制肿瘤细胞增殖和阻断肿瘤新生血管形成的双重抗肿瘤作用[2-3]。 目前临床研究证实，索拉非尼的使用可以有效提高肝癌患者的生存时间[4-5]。miRNA 是近年来发现的一类广泛存在于人体中，不编码蛋白质的短序列RNA(20～25 nt)，在细胞生长和凋亡、干细胞分化、胚胎后期发育过程中发挥着重要的调控作用[6-7]。 值得关注的是，miRNAs 表达谱和表达水平在肝癌肿瘤组织和患者血清中均出现较明显的变化，提示miRNA 对于肝癌的发生和发展中起着非常重要的作用[8]。本研究采用miRNA 芯片技术检测索拉菲尼治疗前后对肝癌患者血清中肿瘤相关miRNA 表达谱改变情况，为进一步研究索拉菲尼治疗肝癌的机制提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    收集2011 年10 月～2012 年9 月在绍兴第二医院及浙江大学医学院附属第一医院接受治疗的6 例肝癌患者的血清样本。所有患者均经组织病理学检测证实为肝细胞肝癌，诊断均符合2001 年肝癌临床诊断标准和临床分期。所选病例应同时满足以下条件：不适合手术治疗，体力状况ECOG 评分≤2 分，Child-Pugh评分A、B 级，预计生存时间>12 周，血小板(PLT)≥60×109/L，血红蛋白(Hb)≥85 g/L，谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)≤正常值上限3 倍以内。本组研究对象中男4 例，女2 例，平均年龄(52.6±14.8)岁；肿瘤直径8.7～15.4 cm；病灶数目1～3 个，其中单发2 例、多发4 例；甲胎蛋白(AFP)平均值(837.42±178.75)ng/mL。

    1.2 主要试剂和仪器

    mirVanaTMmiRNA Isolation Kit (Ambion 公司，美国)；miScript Reverse Transcription Kit (Qiagen 公司，德国)；SYBR Green I(10000×)和PlatinumTaq DNA聚合酶(Invitrogen 公司 ......