唐玲利 韦室百 黄东萍 黄明立 阮 冲

    1.广西医科大学公共卫生学院，广西南宁 530021；2.广西医科大学第一附属医院药学部，广西南宁 530021

    分子生物色谱法(MBC)是20世纪80年代中后期逐渐发展起来的以酶、受体、抗体、传输蛋白等生物大分子为固定相的一类色谱法，是基于生物大分子的特异性相互作用原理进行分离纯化具有活性的化合物或测定生化参数的一项新兴技术[1]。药物作为一类重要的生物活性物质与血浆蛋白存在可逆性的结合平衡，药物分子通过血浆白蛋白的运输到达受体部位发生药理作用，而药物分子在体内与血浆蛋白的相互作用是其发挥药理作用的前提，因此可以通过血浆白蛋白生物色谱筛选药物中的活性成分。付强等[2]通过自制人血清白蛋白色谱柱成功对DL(±)色氨酸进行了手性分离；Bentucci等[3]制备出的血清白蛋白色谱柱，不仅可筛选出药物活性成分，还可通过体外实验反映药物-血清白蛋白的相互作用。蔡汉宁等[4]制备出核心组蛋白色谱柱作用于其活性物质，至少筛选出9种组蛋白作用蛋白。与传统的实验方法相比，分子生物色谱法具有高度专一性、分离速度更快、容易自动化操作、重复性好等优点[5]。

    由于人血清白蛋白价格昂贵，用于制备生物色谱柱成本太高，有学者利用牛血清白蛋白与人血清白蛋白结构相似的特点，制备成牛血清白蛋白色谱柱用于中药活性成分的分离测定。Tan等[6]通过制备的牛血清蛋白生物整体柱，成功的分离出当归的活性成分，并考察了当归提取液在该整体柱上保留的影响。本文主要通过将硅胶氨基功能化与BSA共价键结合合成BSA固定相，制备BSA生物色谱柱，并选择了阿司匹林(ASP)作为与BSA结合的对象来验证BSA色谱柱的性能。ASP作为一种代表性药物，不仅具有卓越的消炎、退热、止痛能力，研究表明它还可以协同干扰素抑制肝细胞癌生长转移[7]，抑制宫颈癌 Hela细胞增殖[8]，预防妊娠期高血压[9]等。通过对ASP及其肠溶片的分离测定，可以进一步探讨生物色谱柱在药物有效成分分离测定中的应用前景。

    1 仪器与材料

    6010紫外可见分光度计(安捷伦科技公司，上海)；LC-10Tvp高效液相色谱仪(日本岛津公司)；spectrum 100傅立叶变换红外光谱仪(美国penkim Elmer仪器有限公司)；Bio-Rad垂直电泳槽、电泳仪(美国 Bio-Rad公司)。

    3-氨基丙基三甲氧基硅烷(APTS)(97%，上海晶纯试剂有限公司，批号：15122)；N，N′-琥珀酰亚胺碳酸酯(98%，阿拉丁公司，批号：25231)；考马斯亮蓝G250(沃凯 ......