葛畅 许春伟 王鲁平 方园 张玉萍

    [摘要] 目的 探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine，5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。 方法 用不同浓度(0.5、1.0、1.5 μmol/L)5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。 结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5 μmol/L 5'-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达，实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR(0.5、1.0、1.5 μmol/L)在HT-29细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.207±0.052)、(1.790±0.033)和(2.016±0.123)；在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.294±0.048)、(1.893±0.061)和(2.204±0.041)。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为(0.456±0.040)、(0.511±0.025)、(0.857±0.031)和(0.934±0.047)；LoVo细胞株相对表达量分别为(0.842±0.032)、(0.844±0.044)、(0.854±0.037)和(0.856±0.034)。以上作用均呈时间、剂量依赖性，Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义(F=144.823，P=0.000；F=476.195，P=0.000)。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义(F=129.674，P=0.000)，但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义(F=0.117，P=0.948)。 结论 结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因的甲基化状态 ......