左长清 钟月春 汪宗桂 戴 忠 吴 铁

    1.广东医学院药理学教研室，广东东莞 523808；2.广东医学院生物化学教研室，广东东莞 523808

    骨质疏松症是世界范围内的常见病、多发病。 促进间质干细胞成骨定向分化与成熟是治疗骨质疏松症的新的有效手段。白藜芦醇是一种含有芪类结构非黄酮类多酚化合物，具有促进间质干细胞向成骨细胞方向分化，并抑制间质干细胞向脂肪细胞分化潜能[1]，但白藜芦醇促成骨分化机制尚未完全阐明。

    间质干细胞成骨分化是一个非常复杂的生物过程[2]，涉及到多基因、多信号通路组成的复杂基因调控网络。 笔者前期通过网络生物学方法研究发现CXCL12、EGFR 和CCL2 基因在重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)成骨分化网络中处于中心节点[3]。 本文应用C3H10T1/2 间质干细胞培养体系， 观察白藜芦醇对rhBMP-2 促成骨分化作用及对CXCL12、EGFR 和CCL2 基因表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    小鼠间质干细胞C3H10T1/2 购自中国科学院上海细胞库。白藜芦醇(Sigma)，rhBMP-2(Human Zyme)，napthol AS-MX phosphate 和Fast Blue BB salt(Sigma)，TRIzol(Invitrogen)，RT-PCR Kit(TaKaRa)，CCK-8(Dojindo)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 CCK-8 法检测药物对细胞增殖功能的影响C3H10T1/2 细胞生长至80%融合，用含0.25%胰酶的消化液消化，制成细胞悬液，以3000 个细胞/孔接种于96 孔板内，37℃5%CO2培养箱中培养。 24 h 细胞贴壁后，更换含不同浓度白藜芦醇(分别为0、5、10、20、40、80、100 μmol/L) 的DMEM 培养液100 μL，细胞继续培养48 h 后， 每孔加入10 μL CCK-8 溶液，培养箱中孵育2 h，以多功能酶标仪读取波长450 nm处的OD 值。 按下述公式计算细胞的生长抑制率：细胞生长抑制率(%)＝(1-用药组平均吸光度/对照组平均吸光度)×100% 。

    1.2.2 碱性磷酸酶染色鉴定成骨分化 C3H10T1/2 接种于24 孔板中，细胞生长至约90%融合，实验分为三组：空白对照组、300 ng/mL rhBMP-2 组、20 μmol/L白藜芦醇+300 ng/mL rhBMP-2 组 ......