头痛宁胶囊对偏头痛大鼠中脑降钙素基因相关肽表达的影响
内源性,1材料与方法,1试剂与仪器,2方法,3统计学方法,2结果,1CGRP质粒标准品,2CGRP标准品实时定量PCR标准曲线,3产物特异性,4各组大鼠中脑CGRPmRNA表达量,3讨论
姚 刚 赵继福 黄 倩 于挺敏▲1.吉林大学第二医院神经内科,吉林长春 130041;2.长春市中医院内科,吉林长春 130022
降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP) 是内源性痛觉调制系统中重要的中介物质, 拮抗和减弱内源性阿片肽在中脑的镇痛效应,参与调节内源性痛觉调制系统的功能[1-2]。头痛宁胶囊对多种慢性头痛(如偏头痛、紧张型头痛等)均有较为满意的疗效[3-4]。 该药对内源性痛觉调制系统的关键结构——中脑CGRP 的表达是否产生影响目前尚无相关研究。本实验通过观察头痛宁胶囊对偏头痛模型大鼠中脑CGRP mRNA 表达的影响,探讨该药对偏头痛的治疗机制。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
头痛宁胶囊(咸阳步长制药有限公司);硝酸甘油注射剂(山西康宝生物制品股份有限公司);RNAiso Reagent、RNA PCR Kit (AMV)Ver.3.0、E.coli DH5α、pEASY-T1 Vector、限制酶BamH Ⅰ和EcoR Ⅴ、SYBR Premix Ex TaqTM均购自大连TaKaRa 公司;AxyPrep DNA Gel Extraction Kit 及AxyPrep Plasmid Miniprep Kit购自Axygen Biosciences 公司;其他试剂均为国产分析纯。PCR 仪(Perkin Elmer GeneAmp PCR system2400);台式冷冻离心机(MIKRO 22R zentrifugen);超低温冰箱(MDF-382E);Sub-Cell GT(Agarose Gel Electrophoresis Systems,BIO-RAD);BIO-RAD Power PAC 200/300稳压稳流电泳仪;凝胶成像系统(Kada);紫外分光光度计(UV-2401PC,Shimadzu),软件:UVPC version 3.9;定量PCR 仪(ABI PRISM 7500)。
1.2 方法
1.2.1 实验动物、分组、药物干预、造模
健康Wistar 大鼠24 只,雌雄各半,200~220 g,由吉林大学基础医学院动物中心提供。 24 只健康成年Wistar 大鼠,随机分为4 组:对照组(A 组),偏头痛组(B 组) ......
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