孙余省 朱冠保 陶礼钧 方 军 徐洪波 林 才

    1.温州医科大学附属第一医院创伤外科，浙江温州 325000；2.温州医科大学附属第一医院普外科，浙江温州 325000；3.温州医科大学附属第一医院烧伤科，浙江温州 325000

    残胃癌亦称胃术后胃癌， 占所有胃癌的0.35%～5.8%。 它常发生于胃大部切除后的残胃内，也可发生在单纯胃肠吻合等术后的全胃内。 胃大部切除术后20 年以上，残胃癌发生率较一般人群高出6～7 倍[1-3]。迄今为止，其发病的分子机制仍然不明，也没有好的早期诊断方法。 因此，寻找特异的分子标志和早期诊断方法，了解残胃癌的发病机制对治疗和预后的判断都有非常重要的意义[4-6]。本研究采用双向电泳技术分离残胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织的所有蛋白质，运用蛋白质组学技术分析残胃癌组织与癌旁组织之间蛋白质组的表达差异， 寻找残胃癌的特异性标志物，分析差异表达蛋白谱的变化与残胃癌的发生发展之间的关系、规律，为全面阐明残胃癌的发病机制和临床残胃癌筛查和诊断以及治疗提供新的途径。

    1 材料与仪器

    1.1 材料

    1.1.1 标本采集

    2010 年2 月～2011 年12 月取3 对残胃癌及癌旁正常胃黏膜组织，均来自温州医学院附属第一医院胃肠外科收治的经手术切除的残胃癌患者， 其中女2例，男1 例，年龄59～75 岁，平均67 岁。 3 例患者均经术后病理学检验，确诊为胃术后“吻合口”低分化腺癌。从肿瘤的非坏死组织中获得残胃癌组织作为观察组， 并从患者距离原发肿瘤在5 cm 以上的胃黏膜层组织获得正常组织作为对照组。 其中，所有癌旁正常胃黏膜组织标本均经病理学检验，证实不存在癌细胞浸润。 所有残胃癌组织标本经病理学检验，证实肿瘤浸润仅穿透浆膜层。 待所有标本离体之后，立即予以取材，并利用生理盐水冲洗多次之后放入液氮中。 将所有标本均置于-80°C 的环境下，储存备用。

    1.1.2 主要试剂

    固相pH 梯度干胶条 (13 cm， 宽pH 范围)、IPG buffer 购自通用电气医疗集团生命科学部；丙烯酰胺、甘氨酸、甲基双丙烯酰胺均购自上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂；十二烷基硫酸钠(SDS)购自湖北鸿运隆生物科技有限公司；尿素购自张家港丰达制药有限公司；3-[3-(胆酰胺基丙基) 二甲氨基] 丙磺酸盐、 过硫酸铵和N，N，N'，N'-四甲基乙二胺(TEMED)均购自北京瑞达恒辉科技发展有限公司；3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)、二硫苏糖醇(DTT)均购自上海嵘崴达实业有限公司；碘乙酰胺购自武汉济森医药化工有限公司；BCA 蛋白浓度试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；UPD-D 蛋白质染料染色试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；UPD-蛋白质染料染色试剂盒购自温州安得森生物科技有限公司 ......