呼格吉乐 高乃康 韩艳秋

    [摘要] 目的 构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体，观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化。 方法 构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后，用双酶切和碱基序列测定，转染载体到胶质瘤U251细胞株，将其分为U251组、PNC-U251组、PCyclinE-1-U251组、PCyclinE-2-U251组、PCyclinE-3-U251组、PCyclinE-4-U251组。通过RT-PCR的结果检测各组CyclinE mRNA的表达量，将干扰效果最好的一组用Transwell小室法检测侵袭能力的变化。 结果 成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4，而且CyclinE mRNA表达受到抑制，其中PCyclinE-1-U251组的穿膜细胞数为(45.4±2.7)个，U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数分别为(75.2±2.9)个和(74.4±3.5)个，U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较，差异无统计学意义(t = 1.23，P = 0.31)，PCyclinE-1-U251组和U251组的穿膜细胞数比较，差异有统计学意义(t = 15.00，P = 0.00)，PCyclinE-1-U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较，差异有统计学意义(t = 13.81，P = 0.00)。 结论 本实验构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体，PCyclinE-1-U251细胞侵袭能力减弱。

    [关键词] 干扰RNA；细胞周期蛋白E；侵袭

    [中图分类号] R733.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2014)09(b)-0009-04

    人脑胶质细胞瘤是人类中枢神经系统中最为常见的肿瘤之一，但是由于其侵袭性能力强，增殖速率快，导致预后极差[1]。尤其是胶质母细胞瘤，恶性程度最高，但是其发病机制目前仍不明确，而且没有像甲胎蛋白、人附睾蛋白、前列腺特异性抗原等常用且有效的肿瘤标志物[2-3]。正常的人脑胶质细胞和胶质瘤细胞的最大区别就在于许多和细胞周期调控的基因发生了改变，细胞周期蛋白E(CyclinE)就是其中之一。CyclinE在人脑胶质瘤中表达，与细胞周期蛋白质依赖激酶2(cyclin-dependent kinase，CDK2)结合促进pRB的磷酸化，并且和细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族的基因结合在一起形成复合物 ......