田 飒 彭学军 何宇明 吴 蓉

    中南大学铁道学院职工医院内科，湖南长沙 410075

    [摘要] 目的 观察外源性硫化氢(H2S)对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。 方法 用25 mmol/L D-葡萄糖(高糖)、外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L)及沉默信息调节子1(SIRT1)特异性抑制剂尼克酰胺(40 mmol/L)处理HUVECs细胞株24 h。实验分为对照组、高糖组、甘露醇组、NaHS(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3 mol/L)组、高糖+NaHS(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L)组和高糖+NaHS(10-3 mol/L)+尼克酰胺组。采用MTT比色法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞内的内活性氧(ROS)水平，Western bolt法检测SIRT1的表达。 结果 与对照组比较，高糖组细胞活力显著降低[OD值分别为(0.76±0.09)和(0.18±0.01)，t = 5.34， P 0.05)。与对照组比较，NaHS(5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L)组的细胞活力显著增加[OD值分别为(0.76±0.09)、(0.95±0.14)、(1.14±0.09)和(1.06±0.12)，t1=2.93，t2=3.41，t3=3.22，均P 0.05]。与对照组比较，NaHS组(5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L)细胞内ROS水平显著降低[ROS水平分别为(356.18±42.96)、(286.14±24.51)、(218.24±29.64)和(201.35±26.41)au，t1 = 2.25，t2=2.84，t3 = 3.17，均P 0.05]。与对照组比较，1×10-3 mol/L NaHS组细胞中SIRT1表达显著上调[蛋白相对表达量分别为(0.48±0.04)和(0.86±0.09)，t = 4.68，P < 0.05]。与高糖组比较，高糖+NaHS(1×10-3 mol/L)组HUVECs细胞中SIRT1表达显著上调[蛋白相对表达量分别为(0.17±0.03)和(0.59±0.08)，t = 4.36，P < 0.05]。

    2.4 SIRT1抑制剂尼克酰胺对H2S作用的影响

    结果如图4所示：SIRT1抑制剂尼克酰胺取消外源性H2S供体NaHS抑制了高糖诱导的HUVECs细胞活力的降低[高糖+NaHS组和高糖+NaHS+尼克酰胺组OD值分别为(0.52±0.04)au和(0.23±0.03)au ......