韦竑宇 梁 立

    中日友好医院脊柱外科，北京 100029

    他莫昔芬作为乳腺癌患者内分泌治疗药物在临床已被广泛应用。 近年来研究发现，他莫昔芬在缺血缺氧性脑损伤、脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)、脑出血等疾病中可发挥神经保护作用[1-3]。但他莫昔芬在SCI 中发挥神经保护作用的机制仍是未解之谜。

    本研究旨在通过检测核因子kappa B p65 (NFκB p65)及磷酸化核因子κB 抑制因子α(pI-κB α)表达，观察他莫昔芬对核因子-kappa B 抑制蛋白激酶复合体/核因子kappa B(IKK/NF-κB)通路的调控；通过检测活性半胱天冬酶-3(caspase-3)活化水平，观察其对细胞凋亡的影响； 通过检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性，观察其对炎症细胞浸润的影响，从而探讨其神经保护机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组

    健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠51 只(由中日友好医院实验动物中心提供)，鼠龄10～12 周，体重200～220 g，随机分为3 组：假手术组(n=17，仅行椎板切除术)； 对照组 (n=17，SCI+硬膜下注射二甲基亚砜)；他莫昔芬组(n=17，SCI+硬膜下注射他莫昔芬)。

    1.2 模型制备及给药

    3 组大鼠麻醉后，假手术组仅行T11～T13段椎板切除。其余两组以T12棘突为中心，咬除椎板，暴露脊髓，用质量为20 g 的不锈钢棒从12.5 mm 高处垂直落下(打击量25 g·cm)，诱发脊髓损伤。

    SCI 后30 min，对照组硬膜下注射2%二甲基亚砜5 mL/kg； 他莫昔芬组损伤部位硬膜下注射他莫昔芬5 mg/kg(溶于2%二甲基亚砜1 mg/mL)。

    术后24 h，3 组大鼠以10%水合氯醛(600 mg/kg)麻醉后， 以含有1 U/mL 肝素的生理盐水进行心脏灌洗，截取10 mm 损伤节段脊髓，置于-80℃冰箱保存备用。

    1.3 免疫印迹法检测NF-κB p65、pI-κB α 和活性caspase-3

    蛋白提取按照蛋白抽提试剂盒说明书进行(普利莱基因有限公司， 北京)，BCA 法蛋白定量检测浓度(普利莱基因有限公司，北京)，计算蛋白电泳加样量。根据蛋白浓度进行上样、电泳、转膜、洗膜、封闭、4℃一抗过夜， 一抗分别为小鼠抗大鼠NF-κB p65 单克隆抗体(1∶1000 ......