张颖奇 李 华 徐 波 满 一 刘微丽

    1.中国石油天然气集团公司中心医院口腔科，河北廊坊 065000；2.中国石油天然气集团公司中心医院介入导管室，河北廊坊 065000；3.郑州人民医院口腔科，河南郑州 450000

    口腔鳞状细胞癌 (oral squamous cell carcinoma，OSCC)是一种常见于口腔颌面部的恶性肿瘤，在口腔颌面部恶性肿瘤中占有相当高的比例，每年有几十万人患病，威胁着人们的生活质量及生命，是一种严重危害人类健康的重大疾病[1-2]。而肿瘤的发生是内外界因素长期作用于人体细胞的结果，因此，学者认为口腔颌面部肿瘤是危害人们健康及生活质量的一种慢性病。而在肿瘤的发生、发展及转移的过程中可能有多个因素及多种机制的参与，如不良生活习惯、理化因素、机械刺激因素、生物学因素以及基因突变[3-4]。研究表明，细胞型FLICE样抑制蛋白(cFLIP)及T-box转录因子(TBX2)在多种肿瘤组织中表现为高表达，故深入探讨两者在肿瘤中的作用，有助于OSCC的防治。

    1 材料与方法

    1.1 病例选择及分组标准

    标本来源:由吉林大学口腔医学院及郑州大学第一附属医院病理科提供。选择病例标准:所有病例术前未行放疗、化疗等任何治疗。术后均经病理组织学确诊。其中男37例，女20例；年龄40～73岁，中位年龄66岁；伴淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者9例；临床分期分为Ⅰ期5例、Ⅱ期7例、Ⅲ期26例、Ⅳ期19例[国际抗癌联盟(UICC)2002年分期标准]。另外部分取口腔黏膜上皮异常增生(DOM)组织(位于癌变组织与正常黏膜交界部位，组织学表现为不典型增生)38例，男21例，女17例；取距离癌肿边缘 5 cm处的正常口腔黏膜(NOM)30例，男15例，女15例。本研究经医院伦理委员会通过，患者知情同意并签署知情同意书。

    1.2 主要试剂

    鼠抗人单克隆抗体c-FLIP和TBX2。生物素化兔抗山羊二抗IgG、SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒、Trizol试剂；M.MLV 逆转录酶，Oligo(dT)12-18 引物，TagDNA聚合酶，硝酸纤维素膜，羊抗兔β-actin抗体，预染蛋白marker，BCATM蛋白定量试剂盒。

    1.3 实验方法

    1.3.1 免疫组织化学方法

    1.3.1.1 处理组织切片，固定，标本染色:加入1∶150的一抗cFLIP/TBX2的单抗，4℃过夜。加入生物素化二抗工作液 ......