黄漫华 葛鸿庆 陈文治 白有翼

    1.广州中医药大学第二临床医学院，广东广州510405；2.广东省中医院骨科，广东广州510370

    葛根素诱导破骨细胞自噬的机制研究

    黄漫华1葛鸿庆2陈文治2白有翼1

    1.广州中医药大学第二临床医学院，广东广州510405；2.广东省中医院骨科，广东广州510370

    目的观察葛根素(Pur)对破骨细胞自噬的影响，探讨其诱导破骨细胞自噬的机制。方法采用骨髓干细胞分化的方式培养原代破骨细胞，并按加入Pur量的不同，分成10、50、100 μg/L的Pur组和空白对照组，采用免疫印迹技术(Western-Blot)检测提取的自噬相关蛋白及Akt-mTOR通路相关蛋白的表达。结果①10、50、100 μg/L浓度的Pur组与空白对照组比较，其膜型与胞质型微管相关蛋白1轻链3的比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)均升高(P<0.01)；10、100 μg/L浓度的Pur组与对照组比较，p62蛋白消耗均增加(P<0.05)。②10、50、100 μg/L浓度的Pur组与空白对照组比较，酸化核糖体蛋白(p-s6)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)均消耗增多(P<0.05)。结论Pur能够促进破骨细胞自噬，Akt-mTOR通路或许是Pur诱导破骨细胞自噬的机制之一。

    葛根素；破骨细胞；自噬；Akt-mTOR通路

    葛根在最早的药学著作《神农本草经》中便有记载，因其能治疗“诸痹”等作用而成为治疗骨质疏松症的一味常用而有效的中药，它可增加骨密度和骨量，改善骨构造而达到治疗作用[1-2]。近年来研究显示，中药葛根在防治骨质疏松症的体内外实验方面都取得了良好的效果，而葛根素(puerarin，Pur)在葛根的提取物异黄酮类化合物中含量最高，是其特有的主要有效成分，因此Pur的作用机制研究成了研究葛根的热点领域[3]。Pur能够促进成骨细胞形成与分化[4]，增加血清碱性磷酸酶(ALP)的表达[5]，而且有文献提出，Pur还能对破骨细胞的活性产生一定的抑制作用[6]。在分子水平上，有文献指出，Pur能通过促进自噬作用来保护1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤[7]。另外有研究提出，破骨细胞自噬水平的提高会对其活性及分化过程起负向调控作用[8]，但其具体机制尚未明确。本研究通过观察不同浓度Pur组和不加入Pur的对照组对破骨细胞自噬的影响，探究其自噬的相关信号通路，旨在从分子水平上探讨Pur对破骨细胞自噬的作用机制。

    1 材料与方法 ......