李江姣 杜慧竟 石继春 陈翠萍 徐 苗 叶 强

    中国食品药品检定研究院 卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京 100050

    肺炎球菌疫苗的保护力可以通过临床效力试验来确定[1]，但由于需要的样本量大、费用高、周期长等原因临床效力试验往往不易实施。建立与肺炎球菌疫苗保护力相关联的实验室检测手段，使用血清学检测结果作为观察终点，能够协助疫苗效力试验评估肺炎球菌疫苗的保护力，大大缩短周期。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)进行的荚膜多糖特异性IgG抗体的定量测定，是目前比较成熟的在婴幼儿新型肺炎球菌疫苗审批中使用的临床效力评价方法[2]。而由于成人存在交叉反应抗体，用ELISA法检测的IgG抗体特异性较低[3]，因此人们试图寻找特异性高并与疫苗保护力相关性更高的替代试验。

    相比ELISA方法，体外调理吞噬试验(Opsonop-hagocytic assay，OPA)可以反映机体抵御肺炎球菌感染的体内机制[4-5]，其结果能更加真实地反映肺炎球菌疫苗的保护效力[6-7]，因此OPA技术在国际疫苗监管体系中受到越来越多的重视，并得到了不断的发展和优化。随着OPA技术的发展，一些实验室改用HL-60细胞作为效应细胞，代替外周血淋巴细胞，并对试剂和试验步骤进行优化。在此基础上，美国阿拉巴马大学肺炎链球菌血清学参比实验室研发的多重调理吞噬实验技术(multiplexed opsonophagocytic killing assay，MOPA)能够同时进行4个血清型的功能抗体检测，极大提高了多价疫苗的检测效率，促进了该项技术的推广应用[8]。然而由于操作相对复杂，技术要求高，我国长期以来对该方法的研究和应用均较缺乏。为了提升我国药检机构对肺炎球菌疫苗的免疫效果评价水平，本研究组前期已经成功建立起MOPA技术[9]，利用该技术对13价肺炎球菌结合疫苗免疫后的12份婴儿血清样本进行了OPA滴度检测，并与相应的ELISA结果进行了比较分析，结果显示，OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价的相关性较高，二者结果具有良好的一致性[10]。

    为了进一步对所建立的MOPA技术进行验证，本研究在两个不同实验室[中国食品药品检定研究院(以下简称“我院”)及该技术的发明单位美国阿拉巴马大学肺炎球菌血清学参比实验室]利用MOPA技术对同一组血清样本(19份血清)针对13个血清型肺炎球菌的OPA滴度分别进行了两轮MOPA检测，并对两实验室间结果及我院内的两轮结果进行了比较分析 ......