赵煜++++++曾杰

    [摘要] 目的 检测胃癌组织中核因子κB(nuclear factor kappa binding，NF-κB)的表达情况，探索NF-κB与临床病理的相关性。 方法 选取2004年1月～2009年1月四川省人民医院病理科收入的50例胃癌患者和同期的50例非肿瘤患者，应用免疫组织化学方法(SP法)检测胃癌患者病灶组织及癌旁组织、非肿瘤患者胃黏膜组织的NF-κB，比较分析不同临床病例特征者的NF-κB的表达情况，并比较不同的NF-κB表达情况者的5年生存率。 结果 胃癌患者胃癌组织、癌旁组织和非肿瘤患者胃黏膜组织中NF-κB蛋白阳性表达率分别为76.0%(38/50)、4.0%(2/50)和16.0%(8/50)，差异均有统计学意义(χ2=20.404，43.511，6.655，均P 0.05)，具有可比性。

    1.2 实验材料

    RAW 264.7细胞株(中国科学院上海细胞所产品)；重组质粒NF-κB荧光素酶(NF-κB-LUC)(美国国立癌症研究所提供)；Lipofectamine 2000转染试剂(美国Invitmgen公司产品)；荧光素酶分析试剂(美国Promega公司产品)兔抗大鼠NF-κB p65抗体一抗(武汉博士德)。SA-1022山羊抗兔IgG二抗SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德)；核-胞浆蛋白制备试剂盒(Pierce公司)。

    1.3 检测方法

    1.3.1 标本处理 RAW 264.7细胞在37℃、5%CO2的条件下，在含10%小牛血清的RPMI 1640培养基(GIBCO-BRL)中贴壁生长。用Lipofectamine 2000介导NF-κB-LUC质粒转染RAW 264.7细胞。首先采集两组研究对象的静脉血标本，采集量为80 mL，分别取4.0 mL置于乙二胺四乙酸(EDTA)试管及BD试管。将EDTA试管中血液样本进行处理，以PBS液进行混合，再以淋巴细胞液加入并离心，3500 r/min，离心15 min，取上清液进行检测，去沉淀物，然后以核-胞浆蛋白制备试剂盒进行检测，依次再进行细胞胞浆提取液(CERI)加入、震荡、冰浴 ......