董 坤 常 静 祖可佳 王欣欣 刘 晖 冯骥良 吕福东

    首都医科大学附属北京佑安医院病理科，北京 100069

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是严重威胁人类生命的恶性肿瘤之一，其发病率在男性癌症中排名第5 位(523 000 例/年，所有癌症中占7.9%)，在女性癌症中排名第7 位(226 000 例/年，所有癌症中占6.5%)[1]。 临床初筛HCC 首选肝脏超声及血清甲胎蛋白(AFP)检测，有肝硬化的患者血清AFP>200 ng/mL时强烈提示HCC 可能， 但并不是所有HCC 患者的AFP 水平都会升高，而且AFP 升高并不单纯出现在HCC中[2]。 最近的研究发现，无论血清中还是组织中AFP的敏感性及特异性均不高[3]。 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是近年来比较热门的一种用于肝细胞癌诊断的标志物，因其敏感性好，特异性高，被认为可能是一种新型癌胚因子[4]。 GPC3 在胚胎肝脏中表达丰富，但是在成人正常肝脏中无表达[5]。 有研究发现GPC3 在HCC 中表达的敏感性为68%～72%，特异性为92%[1]。但是GPC3 在不同分化程度的HCC 中敏感性差异的研究较少。 ki67 作为肿瘤细胞增殖活性的标志物，常用于即时反映肿瘤增殖细胞的数量，判断肿瘤的恶性程度及预后[6]。 本研究的目的是通过对不同分化程度的肝细胞癌组织中GPC3 和ki67 表达的情况进行分析，研究GPC3 在不同分化程度的HCC 中表达的强度，同时研究不同分化程度的HCC 中GPC3 和ki67 的关系。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    收集2010 年7 月～2014 年7 月首都医科大学附属北京佑安医院病理科的HCC 部分肝切除标本共90 例，其中高分化30 例，中分化30 例，低分化30 例。

    1.2 材料和试剂

    GPC3， ki67 抗体及二抗PV6000 均购自北京中山金桥生物技术有限公司。

    1.3 方法

    所有标本先经过10%的甲醛固定后，取材，按脱水、透明、浸蜡、包埋程序处理，4 μm 连续切片，之后进行HE 染色，肝癌病理诊断经2 名副主任以上医师复诊。 HCC 的镜下分级采用WHO 推荐HCC 分级标准[7]。1.3.1 染色方法 采用EnVision 两步法，上述切片经烤片、脱蜡，梯度乙醇由高至低入水，入3%过氧化氢5 min，PBS 缓冲液浸透3 次，每次5 min，放入pH 6.0 柠檬酸缓冲液中高温高压修复：高压锅喷气后 ......