赵 煜 曾 杰

    四川省人民医院急诊外科，四川成都 610072

    我国胃癌的新发病例数和胃癌死亡率居恶性肿瘤之首，其发生、发展机制尚未完全明确。大约65%胃癌患者确诊时已经出现局部或远处转移[1]。 故侵袭与转移的机制成为胃癌研究的重要方向， 研究显示，细胞信号转导在肿瘤的发生、发展中起重要作用[2]。 NFκB 是一种细胞核内信号转导的重要因子， 活化的NF-κB 能靶向调控肿瘤相关基因的转录[3]。NF-κB 与肿瘤发生发展关系密切， 但与胃癌的关系研究不多。我们通过免疫组化法分析NF-κB 在胃癌组织中的表达，探讨其作为判断胃癌预后指标的临床意义，现将材料归纳如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    收集2004 年1 月～2009 年1 月四川省人民医院病理科收治的50 例胃癌根治标本， 其中男38 例，女12 例，年龄30～78 岁；高、中分化23 例，低、未分化27例；有淋巴结转移32 例，无淋巴结转移18 例；肿瘤直径≥5 cm 者33 例，<5 cm 者17 例； 患者术前均未接受放疗和化疗。 另取同期50 例非肿瘤患者胃黏膜组织作为对照，其中男35 例，女15 例，年龄30～75 岁。所有患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P >0.05)，具有可比性。

    1.2 实验材料

    RAW 264.7 细胞株(中国科学院上海细胞所产品)；重组质粒NF-κB 荧光素酶(NF-κB-LUC)(美国国立癌症研究所提供)；Lipofectamine 2000 转染试剂(美国Invitmgen 公司产品)；荧光素酶分析试剂(美国Promega公司产品)兔抗大鼠NF-κB p65 抗体一抗(武汉博士德)。 SA-1022 山羊抗兔IgG 二抗SABC 免疫组化试剂盒(武汉博士德)；核-胞浆蛋白制备试剂盒(Pierce公司)。

    1.3 检测方法

    1.3.1 标本处理 RAW 264.7 细胞在37℃、5%CO2的条件下，在含10%小牛血清的RPMI 1640 培养基(GIBCO-BRL)中贴壁生长。用Lipofectamine 2000 介导NFκB-LUC 质粒转染RAW 264.7 细胞。首先采集两组研究对象的静脉血标本，采集量为80 mL，分别取4.0 mL置于乙二胺四乙酸(EDTA)试管及BD 试管。将EDTA试管中血液样本进行处理，以PBS 液进行混合，再以淋巴细胞液加入并离心，3500 r/min ......