王光楠 陈 艳 秦书俭

    1.解放军第二〇五医院显微外科，辽宁锦州 121001；2.辽宁医学院解剖学教研室，辽宁锦州 121001

    在临床工作中，骨缺损修复一直没有得到很好的解决，目前常把植骨术作为主要的方法。 植骨术可以分为3 种：自体来源植骨术、同种异体或异种植骨术以及组织工程骨植骨术。 前两种方法由于供源不足、供区损伤、移植排斥反应等影响而限制其在临床工作中的广泛应用，但是组织工程骨移植可以克服这些不足和弊端，成为骨缺损修复的新方法。 在组织工程骨移植中，种子细胞的性能与生物材料的选择，以及细胞和生物材料的复合情况是最为核心的部分，关系到组织工程产品的治疗效果，而以及生物产品在使用中的安全性等各个方面。

    脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是存在于脂肪组织基质中的贴壁细胞，具有增殖能力强以及向多个方向分化的潜能[1-2]。其与骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells，BMSCs)相近的分子生物学特性[3-4]，而BMSCs 已经应用于同种异体组织工程化组织构建以及组织修复的研究，ADSCs 是否具有与BMSCs 相似的修复特性，国内外文献少见报道。 本研究旨在探讨ADSCs 诱导产生的成骨细胞与猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa，SIS)支架复合构建生物活性骨膜的可行性， 为进一步应用同种异体ADSCs 诱导产生的成骨细胞为种子细胞构建组织工程骨修复骨缺损提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验对象

    成年健康日本大耳白兔10 只，体重2～2.5 kg，雌雄不限。 动物由上海SLAC 实验动物有限公司提供，合格证号：2007000520595。

    1.2 方法

    1.2.1 制备猪脱细胞SIS、兔ADSCs 培养及构建组织工程骨膜

    1.2.1.1 制备猪脱细胞SIS 采用物理方法处理及化学方法，按文献[5]方法制备脱细胞小肠黏膜下层，冻干后用环氧乙烷消毒，备用。 具体方法如下：

    物理方法处理：取屠宰4 h 内经过检疫的健康成年猪的小肠，先使用清水洗净，再挑选粗细均匀的管腔管壁没有破损且无淋巴结的部位。 翻转小肠，使黏膜面向外，清除小肠黏膜层直至黏膜下层暴露，再次翻转小肠，使用包裹有纱布的刀柄去除浆膜层和肌层的组织。 用40℃水持续冲洗干净。

    化学方法：按文献[5]方法制备，将经过上述物理方法处理后的小肠首先进行如下化学方法处理操作(以下所有操作均在室温进行 ......