宋 建 戈 伟 刘 梁

    武汉大学人民医院肿瘤Ⅱ科，湖北武汉 430060

    子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，手术和放疗作为局部治疗不能控制子宫颈癌的亚临床病灶，导致中、晚期子宫颈癌的治疗效果较差，而化疗作用于全身组织器官杀灭肿瘤，通过特殊的给药方式还可以提高药物的局部浓度，以顺铂为基础的联合化疗具有重要的抗宫颈癌活性[1-2]，有报道单独使用其反应率达23%～50%[2-3]，顺铂作为细胞周期非特异性抗癌药物[4]，对肿瘤细胞的抑制作用较强，但是毒副作用较大。 金水鲜作为国家自主研发的中药，承合传统的中医扶正荡邪理论，经济且低毒，本课题组前期研究发现金水鲜冻干粉能够增强对铂类药物敏感的肺癌细胞的增殖抑制和促进细胞凋亡[5-6]，是否同样会增强对铂类药物敏感的宫颈癌细胞的杀伤作用不得而知，因此本研究联合使用金水鲜冻干粉以及顺铂观察对宫颈癌细胞产生的生物学影响，以分析其是否对宫颈癌细胞化疗效果有增强作用，为将来临床的联合用药奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株及试剂

    人源宫颈癌C-33A 细胞株：购自美国ATCC。 临床用金水鲜冻干粉(北京建生药业有限公司惠赠，批号：20140821)，分装成浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0 mg/mL的药物悬液。 取0.3 mg 顺铂(云南生物谷药业股份有限公司， 批号：H39021357) 溶解于0.9%氯化钠溶液10 mL 中，配成终浓度30 μg/mL 溶液。 主要实验试剂有RPMll640 培养液 (GIBCO)、 胎牛血清(GIBCO)、CCK-8 试剂盒 (北京世纪康为世纪生物科技有限公司)、BCA 蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所，C230)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)单抗(Santa Cruz 公司，美国)、p21 一抗(Santa Cruz 公司，美国)、p53 一抗(Santa Cruz 公司，美国)、HRP-羊抗兔IgG(Santa Cruz 公司，美国)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养 宫颈癌C-33A 细胞培养于含10%FBS(胎牛血清)的RPMI l640 培养液，置于CO2培养箱，37℃静置培养， 细胞培养2～3 d 后换液，5～7 d 后进行传代， 用培养液将细胞数调整为实验所需密度，向6 cm 培养皿中加入5 mL 完全培养基， 细胞传代时向管中加入80 μL 台盼蓝溶液，显微镜下细胞计数板计数，同时判断细胞密度及存活率，细胞状态处于对数生长期时进行实验 ......