牛素生 李 楠 张 燕 刘俊宁 林建华

    1.福建中医药大学骨伤学院，福建福州 350122；2.福建医科大学第一附属医院骨科，福建福州 350005

    龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制

    牛素生1李 楠1张 燕1刘俊宁1林建华2

    1.福建中医药大学骨伤学院，福建福州 350122；2.福建医科大学第一附属医院骨科，福建福州 350005

    目的观察龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用并探讨其机制。方法全骨髓贴壁法分离BMSCs，培养至F3代。MTT法检测龟鹿二仙胶含药血清增殖作用并确定最佳浓度；F3细胞分为10%FBS组、10%KB组、10%GLEXJ组和Classical组，检测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)比活性，茜素红染色方法观察对BMSCs成骨分化的作用，RT-PCR方法和Western blot检测Fzd-2、Axin-2基因和蛋白表达的变化。结果MTT结果显示浓度为10%的龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖；10%GLEXJ组和Classical组ALP比活性高于其余两组，差异有统计学意义(P<0.05)；且随着时间的延长，增加更明显(P<0.05或P<0.01)，茜素红染色见橘红色钙结节着色；10%GLEXJ组Fzd-2 mRNA和蛋白表达水平显著高于其余各组，差异均有统计学意义 (P<0.05或P<0.01)；10%GLEXJ组Axin-2 mRNA和蛋白表达水平显著低于10%FBS组和10% KB组，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖并诱导其向成骨细胞分化，其机制可能与增强Fzd-2表达、抑制Axin-2表达和激活Wnt/β-catenin通路密切相关。

    龟鹿二仙胶；骨质疏松症；骨髓基质干细胞；成骨分化

    骨质疏松症是一种以低骨量和容易导致骨折为特征的全身骨代谢疾病。近年来，中医药越来越多应用于骨质疏松症的防治。龟鹿二仙胶出自《医方考·虚损劳瘵门》，临床常用于骨质疏松症的治疗[1-2]，且无毒副作用[3]。前期研究表明龟鹿二仙胶能增加去卵巢大鼠骨密度和骨强度[4-5]，但其作用机制尚不明确。本实验通过体外细胞培养观察龟鹿二仙胶含药血清对骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的作用并探求其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 SPF级雌性SD大鼠65只 ......