陈一竹 杨文龙 郭玲玉 张明亮 刘俊岭 张俊峰.上海交通大学医学院附属第九人民医院心内科，上海 0900；.上海交通大学医学院基础医学院，上海 0005

    白术内酯Ⅱ抗血小板作用及对血小板中蛋白激酶B磷酸化水平的影响

    陈一竹1杨文龙1郭玲玉1张明亮1刘俊岭2张俊峰1

    1.上海交通大学医学院附属第九人民医院心内科，上海201900；2.上海交通大学医学院基础医学院，上海200025

    目的 观察白术内酯Ⅱ在体外对小鼠和人血小板活化的影响，并探讨其可能的分子机制。方法 通过体外血小板聚集实验，采用比浊法测定不同浓度白术内酯Ⅱ对胶原诱发的小鼠及人血小板聚集的影响；通过血小板的铺展实验，检测白术内酯Ⅱ对人血小板铺展的作用；运用Western blot检测人血小板中蛋白激酶B(Akt473)的磷酸化水平。结果 白术内酯Ⅱ可抑制胶原刺激下小鼠和人血小板的体外聚集(P1 材料与方法

    1.1试剂与仪器

    健康人单采血小板由上海瑞金医院提供。胶原购自CHRONO-PAR(美国)，蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂购自瑞士的罗氏公司，三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)、前列腺素E(PGE1)、纤维蛋白原(Fg)购自西格玛公司(美国)，磷酸化蛋白类激酶B(Akt473)抗体、GAPDH抗体购自Cell Signaling公司，鬼笔环肽购自美国生命技术公司。辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔和山羊抗鼠IgG购自Jackson公司，Western发光液为Milipore公司生产，白术内酯Ⅱ购自上海纯优生物科技有限公司。血小板聚集仪 (CHRONO-LOG，美国)，正置荧光显微镜(Zeiss公司，德国)，电泳仪(上海天能科技有限公司，上海)。

    1.2实验动物

    C57BL/6野生型小鼠，6～8周，雌雄各半，体重(20±2)g，动物合格证号：2015000510330。动物饲养在上海交通大学医学院SPF级动物房，实验开始前1周进行适应性饲养，温度(23±1)℃，湿度(50±5)%，饲料和水均在消毒后由动物自由摄取。

    1.3方法

    1.3.1小鼠血小板聚集1%异戊巴比妥(0.2 m L/只)麻醉小鼠后，用加有抗凝剂枸橼酸钠的2.5 mL注射器抽取小鼠的腹主动脉血至15 mL BD管中，加入等体积的0.9%生理盐水，apyrase(终浓度1 U/mL)以及PGE1(终浓度为0.1μg/mL)，颠倒混匀后室温离心，1050 r/min，10 min，吸取上层富含血小板血浆(PRP)至新的15 m L BD管中 ......