庄少虹 黄宝怡 曾艳婷 刘曼婷 徐佳慧 刘见桥广州医科大学附属第三医院广东省普通高校生殖与遗传重点实验室，广东广州 510150

    白藜芦醇对冻融后小鼠成熟卵母细胞氧化应激水平和线粒体功能的影响

    庄少虹黄宝怡曾艳婷刘曼婷徐佳慧刘见桥

    广州医科大学附属第三医院广东省普通高校生殖与遗传重点实验室，广东广州510150

    目的 探讨白藜芦醇(Res)对冻融后小鼠成熟卵母细胞活性氧(ROS)水平和线粒体功能的影响。方法 根据是否在冷冻复苏培养液中添加Res，将解冻后存活的卵母细胞分为两组：Res组和对照组。二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测ROS水平，JC-1荧光染色检测线粒体膜电位(ΔΨm)。结果 卵母细胞玻璃化冷冻解冻的存活率为89.0%(267/300)，其中125、142枚分别进行ROS和ΔΨm检测。Res组的ROS水平 (0.64±0.17)较对照组(1.00±0.26)明显降低(P<0.01)，Res组的ΔΨm(1.16±0.40)较对照组(0.87±0.28)明显增加(P<0.01)。结论 Res能降低小鼠冻融卵母细胞的氧化应激水平并增加其线粒体功能，可能有助于卵母细胞的损伤修复。

    白藜芦醇；卵母细胞；玻璃化冷冻；活性氧；线粒体膜电位

    近年来，人类卵母细胞的冷冻保存在辅助生殖领域中扮演着重要角色。特别是随着玻璃化冷冻技术的发展，卵子冷冻技术已经逐渐从“实验”阶段向“临床”使用阶段迈进。但由于卵母细胞是人体内最大的细胞，有其特殊的生物学特性，其相对于胚胎和精子更容易受到冷冻损伤。有研究指出，冷冻会造成卵母细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)的增加[1]，已有证据表明，ROS的增加会进一步影响卵母细胞内的纺锤体等结构，并造成卵子受精失败和胚胎发育障碍[1-3]。另有学者报道，进行玻璃化冷冻的卵母细胞，其线粒体膜电位会显著降低[4-5]。白藜芦醇(resveratrol，Res)是近年研究热度仅次于紫杉醇的药物，具有抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老等作用[6-8]，其对冷冻复苏的卵母细胞是否有保护作用仍罕有报道，因此，本研究通过在冻融卵母细胞的复苏培养液中添加Res，试图减轻冻融对卵母细胞造成的不良影响。

    1 材料与方法

    1.1材料与仪器

    7～9周龄的SPF级雌性ICR小鼠(购自广东省实验动物中心)；孕马血清促性素(PMSG)(宁波第二激素厂)；绒促性素(HCG)(上海丽珠制药)；白藜芦醇(Sigma公司)；M2培养液(Sigma公司)；透明质酸酶(Vitrolife Sweden AB Goteborg ......