何玲 刘露 陈国俊

    1.贵州省黔南州人民医院神经内科，贵州都匀558000；

    2.重庆医科大学附属一；神经病学重点实验室，重庆400016

    多聚左旋赖氨酸对大脑皮层星形胶质细胞体外培养的影响

    何玲1，2刘露2陈国俊2

    1.贵州省黔南州人民医院神经内科，贵州都匀558000；

    2.重庆医科大学附属一；神经病学重点实验室，重庆400016

    目的探讨不同浓度多聚左旋赖氨酸(PLL)对体外培养大脑皮层星形胶质细胞(AS)的影响。方法采用酶消法、差速贴壁获得大脑皮层AS细胞，细胞分为四组，分别种植于对照组(未包被PLL)、25μg/mL PLL包被组、50μg/mL PLL包被组、100μg/mL PLL包被组包被的培养瓶或板内，运用细胞计数检测细胞贴壁率及CCK检测法绘制原代细胞生长曲线；待细胞铺满瓶底，予振荡及传代法去除其他类型细胞。第三代AS，通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)兔疫荧光计数细胞纯度及CCK检测细胞活性。结果细胞贴壁率随PLL包被浓度的增加而增加；原代AS生长曲线显示对照组生长速度较三组PLL包被组慢；除100μg/mL PLL包被组[(90±0.53)%]外，其余各组细胞纯化率均大于95%；对照组第4、6天细胞活性均明显低于各PLL包被组，差异均有高度统计学意义(P<0.01)。结论PLL能有效地促进AS的贴壁和生长，适宜包被浓度为25～50μg/mL。

    星型胶质细胞；体外培养；多聚左旋赖氨酸；免疫荧光；胶质纤维酸性蛋白

    随着近年对大脑皮层星形胶质细胞(AS)的研究发现，AS以积极主动的方式参与调控突触传递，在突触重塑及学习记忆过程中起着重要的作用[1-2]。电生理技术的发展，也让人们了解到，AS存在着许多离子通道[3]，与神经元之间进行着积极的双向信息交流[4]。因此，对AS的深入研究在神经退行性疾病如阿尔茨海默病中得到了进一步的重视[5-6]。多聚左旋赖氨酸(PLL)是常用的包被基质之一，可促进细胞黏附、增生、分化[7]。对体外培养AS中是否使用PLL等促细胞黏附的包被基质，以及PLL工作浓度，各文献报道差异较大，本研究比较了文献中PLL几种常用包被浓度[8-10]，并通过检测细胞贴壁率、纯度、活性以进一步探讨其对体外培养AS的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    新生1～3日龄斯普拉格-杜勒鼠(SD)大鼠(动物合格证号：SCXK渝：2012-0001)，雌雄不限，由重庆医科大学动物实验中心提供。

    1.2 仪器及试剂 ......