杨海峰 杨亮 毕艳华 黄淑红

    1.北京市仁和医院神经外科，北京102600；2.河北医科大学第二医院神经外科，河北石家庄050000；3.华北石油管理局总医院科研教学培训科，河北任丘062550；4.山东大学医学院神经生物学系，山东济南250012

    ShRNA靶向沉默STX 8基因对U251细胞增殖和迁移侵袭的影响

    杨海峰1杨亮2毕艳华3黄淑红4

    1.北京市仁和医院神经外科，北京102600；2.河北医科大学第二医院神经外科，河北石家庄050000；3.华北石油管理局总医院科研教学培训科，河北任丘062550；4.山东大学医学院神经生物学系，山东济南250012

    目的探讨敲低STX8基因对脑胶质瘤细胞瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法构建STX8-shRNA-pSuper表达载体转染U251细胞，分别用CCK8法、划痕实验、Transwell实验检测细胞增殖、迁移侵袭能力。结果CCK8法、划痕实验、Transwell实验结果显示，STX8干扰后细胞增殖、迁移侵袭能力显著下降。结论STX8基因的敲低能有效抑制U251细胞增殖、迁移侵袭能力，STX8基因有可能成为胶质母细胞瘤基因治疗的新靶点。

    STX 8基因；胶质细胞瘤；RNA干扰；U251细胞

    脑胶质细胞瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤之一，目前临床治疗手段疗效有限[1-2]，需要迫切寻找其关键致癌因子。近年来，研究发现SNARE蛋白在肿瘤发生发展中发挥重要作用，其相关蛋白能否作为肿瘤治疗的分子靶点也受到了很多关注[3-5]。成员之一Syntaxin8(STX8)参与了胶质母细胞瘤的发展[3]。目前尚未有STX8在脑胶质瘤细胞中参与哪些细胞功能的研究，本文通过分析脑胶质瘤细胞株U251中STX8的作用，探讨其在脑胶质瘤中的发生发展和侵袭的意义。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    pSuper院OligoEngine公司，STX8抗体院BD Bio-sciences公司，茁-tubulin抗体院Sigma公司，HEK293细胞为实验室保存，U251细胞系院中科院上海细胞库。

    1.2 载体构建及筛选

    将干扰序列溶解至3μg/滋L，取正反oligo各1滋L，溶于48滋L退火buffer。靶序列院1#GACCGAAGACA-GAACCTCTTGCTC；2#ATACGATTCTACTTGT-

    CAAATCTC。退火产物及载体(pSuper)酶切、连接、转化、测序。使用测序成功的2个pSuper-STX8干扰质粒(1# ......