曲丽丽 于滨 孔维佳

    1.中国医学科学院药物研究所，北京100050；2.中国医学科学院医药生物技术研究所，北京100050

    Nrf2通路在天麻素抑制油酸诱导的HL-7702细胞氧化应激中的作用

    曲丽丽1于滨2孔维佳2

    1.中国医学科学院药物研究所，北京100050；2.中国医学科学院医药生物技术研究所，北京100050

    目的研究核因子E2相关因子2(Nrf2)在天麻素(GSTD)抑制油酸(OA)诱导的肝细胞氧化应激中的作用。方法体外培养HL-7702细胞，以Nrf2特异性的小干扰RNA(siRNA)转染细胞以沉默其表达，以浓度为100μg/mL的GSTD处理细胞24 h后提取细胞总蛋白以及核、质蛋白，以免疫印迹法检测Nrf2和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。在抗氧化实验中，Nrf2 siRNA转染后以浓度为0.6 mmol/L的OA与GSTD共同处理细胞24 h，以试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)的含量。结果与对照组细胞比较，Nrf2 siRNA转染细胞后Nrf2总蛋白、细胞核内Nrf2蛋白和HO-1蛋白的基础表达水平均显著下降(P1 材料与方法

    1.1 材料和仪器

    GSTD购自浙江诚意药业有限公司，批号20120509，纯度逸98%。油酸(OA)和牛血清白蛋白(BSA)购自美国Sigma公司。胎牛血清(FBS)、DMEM培养基、非必需氨基酸、1%双抗(青霉素与链霉素)购自美国GIBCO公司。人源的Nrf2 siRNA购自美国Santa Cruz公司；X-treme Gene siRNA Transfection Reagent购自美国R&D公司；Opti-MEMR培养基购自美国Invetrogen公司。M-PERRMammalian蛋白裂解液、HaltR蛋白酶&磷酸酶双重抑制剂、细胞核质蛋白分离提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自美国Thermo Scientific公司。Nrf2、HO-1、茁-肌动蛋白(ACTB)、组蛋白H3(histone H3)的单克隆抗体购自美国Cell Signaling公司。PVDF膜购自美国Millipore公司。总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒和活性氧(ROS)检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养HL-7702细胞常规培养于含10% FBS、1%非必需氨基酸和双抗(100 U/mL青霉素+ 100 U/m L链霉素)的DMEM培养基中 ......