张东强 徐细明 张美霞

    武汉大学人民医院肿瘤中心，湖北武汉 430060

    NEK2对肝癌细胞株HepG2迁移侵袭的影响及其机制的研究

    张东强徐细明▲张美霞

    武汉大学人民医院肿瘤中心，湖北武汉430060

    目的 探讨NEK2基因对人肝癌细胞株HepG2迁移侵袭能力的影响及其机制。方法 通过实时荧光定量PCR及Western blot法检测4种人肝癌细胞系HepG2、Huh7、SMMC、7402中NEK2的表达水平，并选用正常肝细胞株LO2作为参考。设计siRNA序列转染HepG2细胞，将HepG2细胞分为3组：空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义序列)及干扰组(细胞转染NEK2-siRNA序列)。观察转染前后HepG2细胞中的NEK2表达水平变化。利用Transwell小室观察转染前后细胞迁移及侵袭能力的改变。应用蛋白印迹技术检测MMP2、MMP9、TIMP-1蛋白的表达情况。 结果5种细胞株中，NEK2在HepG2细胞中的表达量最高，与LO2细胞比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。HepG2细胞转染NEK2-siRNA后，与空白对照组及阴性对照组比较，干扰组NEK2的表达水平显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Transwell小室检测细胞迁移，空白对照、阴性对照的穿膜细胞数分别为(415.00±6.36)、(411.75±9.90)，与干扰组比较(99.50±7.07)，差异均有高度统计学意义(P<0.01)。Transwell小室检测细胞侵袭，空白对照组、阴性对照组的穿膜细胞数分别为(220.50±6.40)、(219.75± 3.54)，与干扰组(38.50±3.54)比较，差异均有高度统计学意义(P<0.01)；转染NEK2-siRNA 48 h后，HepG2细胞中TIMP-1蛋白表达较空白对照组、阴性对照组明显上调，而MMP2及MMP9蛋白表达明显下调，差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论NEK2可能通过TIMP-1、MMP2及MMP9调控人肝癌HepG2细胞的侵袭转移。

    NEK2；siRNA；迁移；侵袭

    [Abstract]Objective To identify the effects of NEK2 on migration and invasion and the related mechanism in human liver cancer cells of HepG2.Methods Real-time PCR and Western blotwere used to detect the NEK2 expression in HepG2 ......