饶金鹏 邱 枫 刘 青 蔡益婷 金 敏 金 帆

    1.浙江大学医学院附属第二医院生殖医学中心，浙江杭州310052；2.浙江大学医学院附属妇产科医院生殖医学中心，浙江杭州310006

    温度、冻存液体积和操作时间对小鼠卵子Cryotop玻璃化冻融复苏率的影响

    饶金鹏1邱枫1刘青1蔡益婷1金敏1金帆2

    1.浙江大学医学院附属第二医院生殖医学中心，浙江杭州310052；2.浙江大学医学院附属妇产科医院生殖医学中心，浙江杭州310006

    目的探讨Cryotop法中冷冻操作环境温度、加载覆盖的保护液微滴体积以及投入液氮前暴露于高浓度冷冻保护剂(CPA)的时间对小鼠MⅡ期卵子玻璃化冻融效果的影响。方法对6周龄KM系小鼠促排卵、脱颗粒细胞以获得形态良好的MⅡ期卵子，用Cryotop法对其进行玻璃化冻融，卵母细胞随机分组后实验方案如下：根据冷冻环境温度的不同，设置37℃操作组和22℃操作组；根据薄膜上包被的保护液微滴体积的不同，设置0.5～1.0 μL组；根据与CPA的接触时间的不同，将冷冻卵子分为30～40 s暴露组、>40～90 s暴露组和>90～180 s暴露组。随后对各组卵母细胞的复苏率进行统计比较。结果22℃操作组小鼠卵子的复苏率为81.4%，显著高于37℃操作组的50.7%，差异有高度统计学意义(P0.5～1.0 μL组复苏率(85.7%、90.5%、83.2%)比较，差异无统计学意义(P>0.05)。>90～180 s CPA暴露组的卵子复苏率为74.7%，低于30～40 s暴露组(83.3%)和>40～90 s暴露组(78.9%)，差异无统计学意义(P> 0.05)。结论使用Cryotop法冻融卵母细胞时，不必刻意追求0.5-1.0 μL，and time of oocyte treated in CPA solution of 30-40，>40-90，>90-180 s.The survival rates of warmed oocytes in the different treatments were compared. Results The oocyte survival rate at 22℃of environmental temperature was 81.4%which was significantly higher than that at 37℃(50.7%)(P0.5-1.0 μL，respectively(P>0.05).The survival rate seemed to be decreased with the increased treatment duration of oocyte in CPA solution(74.7%in>90-180 s ......