孙丽娜 韦超 吉兴照

    [摘要] 目的 探讨高危型HPV-18E6对树突细胞中p53蛋白磷酸化的作用。 方法 构建真核表达载体pGFP-18E6，转染小鼠骨髓源性的树突细胞，采用磷酸化的p53抗体免疫荧光化学染色，共聚焦显微镜下动态观察其表达水平。选用p53磷酸化位点的抗体(包括Ser6、Ser9、Ser15、Ser20、Ser37、Ser46和Ser392)对GFP-18E6融合蛋白表达的细胞进行免疫细胞化学染色，进一步探讨磷酸化的p53蛋白在转染后12～72 h的动态表达水平。 结果 树突细胞在转染pGFP-18E6和pEGFP-C1质粒后，GFP-18E6主要定位于细胞核内，而对照组只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。GFP-18E6诱导了p53蛋白的Ser15、Ser20和Ser392三个位点磷酸化。激光共聚焦显微镜测量细胞荧光强度显示，GFP-18E6的表达与时间有相关性。 结论 高危型HPV-18E6可以诱导树突细胞的p53蛋白发生多个位点的磷酸化，包括Ser15、Ser20和Ser392，p53多个位点磷酸化是病毒宿主相互作用的一种机制。

    [关键词] HPV18-E6；树突细胞；p53磷酸化；定位

    [中图分类号] R373.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)12(c)-0022-04

    [Abstract] Objective To study the effect of p53 phosphorylation in high-risk HPV-18E6 expressed bone marrowed dendritic cells. Methods The eukaryotic expression vector pGFP-18E6 was constructed and transfected into mouse bone marrow derived dendritic cells. The expression level of p53 was detected by immunofluorescence staining under the confocal microscope. Antibodies to p53 phosphorylation sites (including Ser6， Ser9， Ser15， Ser20， Ser37， Ser46， and Ser392) were used for immunocytochemical staining of cells expressing GFP-18E6 fusion protein ......