索南昂秀+曹振宇+祁腾民

    [摘要] 目的 探討TH17细胞及细胞因子在缺氧环境下在脊柱结核患者复发机制的影响。 方法 选择2015年9月～2017年1月青海省人民医院就诊的脊柱结核病患者46例，依据临床表现和实验室检查将其分为初发组(27例)和复发组(19例)。对患者TH17细胞及细胞因子IL-6、IL-1β、IL-23、TNF-α及IFN-γ进行检测，并对CCL20、CCL22、CCL27进行检测，观察Th17细胞趋化指数变化及Th17细胞表达CCR受体及CCL配体的关系。 结果 与初发组比较，复发组患者的TH17细胞比例明显升高(P 0.05)，具有可比性。所有患者入院后进行的TSPOT.TB结果和TST结果均为阳性，诊断均参照中华医学会结核病学分会制订的结核诊断和治疗指南中的标准。所有脊柱结核病的患者，同时可伴有肺部结核(非活动期)及其他部位结核。其中临床诊断包括脊柱磁共振及CT影像学阳性，而患者肺部影像学检查结果则提示可能为肺结核相关性病变，且完善γ-干扰素试验(+)、结核菌素试验(TST)、抗结核抗体检查阳性，经诊断性治疗有效后可伴有轻度咳嗽咳痰等肺结核可疑症状的病例；其他结核确诊病例包括患者痰液涂片抗酸染色检查(±)，而培养结核杆菌(+)及病变部位病理学诊断为结核杆菌病变的病例[4-6]。同时排除肝、肾功能严重障碍性疾病的患者，自身免疫性疾病患者，应用糖皮质激素等免疫抑制剂的患者。

    1.2 方法

    1.2.1 Th17细胞的检测

    选取抗凝管(EDTA)对来自于高海拔地区缺氧条件下的脊柱结核病初发和复发的患者抽取静脉血液6 mL，抽血时间均为该类患者住院并已经确诊后的次日清晨，确诊条件为：①影像学资料及入院行结核菌素试验(+)；②完善γ-干扰素试验(+)。抽取患者的血液样本必须严格控制于室温下保存，以及抽血当天必须及时进行检测。

    1.2.1.1 样本前处理 ①选用RPMI对已选取的250 μL全血标本进行1∶1等体积稀释。②将稀释液加入流式检测的专用管中，并且依次加入：15 μL 1 μg/mL PMA工作液，10 μL 50 μg/mL Ionomycin工作液，6.6 μL 0.2 mg/mL Monensin工作液。将以上试验液进行混匀，并放置于室温条件下的CO2培养箱中进行培养，时长5～7 h。③将以上试验液从培养箱中取出后再依次加入：CD3-PC5 抗体10 μL，CD45-ECD 抗体10 μL，CD4-FITC 抗体10 μL，在室温条件下将以上试验液避光孵育约15～20 min ......