由淑萍 蒋红 何丽娟

    [摘要] 目的 探讨盐负荷和醛固酮对乳鼠原代心肌细胞肥大的协同作用。 方法 原代培养乳鼠心肌细胞，随机分为正常对照组、醛固酮10～7 mol/L(Ald)组、等钠浓度140 mmol/L(NS)组、高钠浓度146 mmol/L(HS)组、等钠浓度140 mmol/L+Ald 10～7 mol/L(NS+Ald)组、高钠浓度146 mmol/L+Ald 10～7 mol/L(HS+Ald)组；其中NS+Ald与HS+Ald组先不加Ald，培养48 h后，加入Ald，所有处理组继续培养24 h。免疫荧光法测定心肌细胞横截面积差异，细胞活性实验(CCK-8)检测其活性，流式细胞仪检测细胞凋亡率，荧光定量PCR检测内皮素-1(ET-1)、一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的差异。 结果 NS+Ald组及HS+Ald组心肌细胞横截面积较Ald组、NS组、 HS组明显增加(P 98%可行后续实验。

    1.4 免疫荧光法测定盐负荷和醛固酮对心肌细胞横截面积的影响

    以1×105/mL将心肌细胞接种于6孔板，3个复孔/组，24 h后DMEM培养液同步化细胞；实验分为正常对照组、醛固酮10～7 mol/L(Ald)组、等钠浓度140 mmol/L(NS)组、高钠浓度146 mmol/L(HS)组、等钠浓度140 mmol/L+Ald 10～7mol/L(NS+Ald)组、高钠浓度146 mmol/L+Ald 10～7 mol/L(HS+Ald)组；其中NS+Ald组与HS+Ald组先不加Ald，培养48 h后，再加入Ald，所有处理组继续培养24 h。余操作同细胞鉴定，荧光显微镜观察细胞形态。实验重复3次，ImageJ 1.46r软件计算心肌细胞面积。

    1.5 CCK-8法实验检测心肌细胞存活率

    以5×104/mL将心肌细胞接种于96孔板，分组同“1.4”，不同实验组同步化细胞72 h，设立不加细胞的调零孔，按试剂盒说明书添加CCK-8溶液并检测吸光度。6个复孔/组，实验重复3次。细胞存活率(%)=[A(不同处理)-A(调零)]/[A(正常对照)-A(调零)]×100% ......