宋丹++郑勇斌+童仕伦++肖旷+杨超++孙伟+秦凯迪

    [摘要] 目的 構建荷载LOXP-DsRed-LOXP系统的细胞，并探索该系统在体内外检测Cre酶活性中的应用。 方法 构建稳转株MCA38LOXP-DsRed-LOXP并体外验证检测Cre酶效能。将Balb/c裸鼠随机分为两组(n=10)，分别在结直肠黏膜下移植MCA38Cre-Luciferase与MCA38Luciferase细胞株，两周后取灌肠液作用于MCA38LOXP-DsRed-LOXP，验证该系统体内检测Cre酶效能。APCLOXP/LOXP小鼠随机分为两组(n=20)，分别使用可表达Cre酶及荧光素酶(Luciferase)的慢病毒颗粒(CL组)与仅表达Luciferase的慢病毒颗粒(L组)行小鼠结直肠黏膜下注射，感染后第3天及第3周末取灌肠液检测Cre酶活性及表达情况，同时行小鼠活体成像检测Luciferase表达情况，验证该系统在判断Cre酶活性与预测基因修饰成功率中的应用。 结果 Cre重组酶作用于MCA38LOXP-DsRed-LOXP48 h后，红色荧光明显减弱。裸鼠灌肠液作用于MCA38LOXP-DsRed-LOXP细胞株48 h后，MCA38Cre-Luciferase组红色荧光明显减弱。CL组模型鼠病毒注射后第3天检出16只小鼠荧光素酶及灌肠液Cre酶阳性，第3周末8只小鼠荧光素酶及灌肠液Cre酶阳性。L组模型鼠病毒注射后第3天检出17只小鼠荧光素酶阳性而灌肠液Cre酶均阴性，第3周末检出8只小鼠荧光素酶阳性，灌肠液Cre酶均阴性。 结论 成功构建Cre酶检出系统MCA38LOXP-DsRed-LOXP，实现了体内、外无创性检测Cre酶活性及表达情况，并以此评价APCLOXP/LOXP小鼠结直肠黏膜基底干细胞病毒感染效率及基因修饰情况。

    [关键词] Cre酶；DsRed荧光蛋白；LOXP-DsRed-LOXP系统；结直肠癌

    [中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2017)11(c)-0004-05

    Construction and application of LOXP-DsRed-LOXP system

    SONG Dan ZHENG Yongbin TONG Shilun XIAO Kuang YANG Chao SUN Wei QIN Kaidi ......