李响 于雷 范文红

    [摘要] 目的 建立高效陰离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定重组人促红素(rhEPO)中唾液酸含量的方法。 方法 将rhEPO样品用5 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)换液后，调整浓度到0.33 mg/mL，取20 μL样品溶液加入10 mU/μL的神经氨酸酶20 μL，37℃孵育1 h后，加入0.04 mmol/L的尤罗索尼克酸(KDN)内标物50 μL，再加入70 μL超纯水，混匀后分析测定。采用CarboPac PA1分析柱，CarboPac PA100保护柱，流动相为150 mmol/L氢氧化钠与125 mmol/L乙酸钠混合溶液，柱温30℃，流速1.0 mL/min，等度洗脱，数据采集时间15 min。根据唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值与含量的量效关系，计算样品中的唾液酸含量。 结果 唾液酸标准品浓度在0.0015～0.0075 μg/mL范围内与唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值呈良好的线性关系，R2 > 0.99；重复性RSD < 4%；(低、中、高浓度)样品回收率分别为94.9%、94.3%、96.7%。用建立的HPAEC-PAD法测定了6批rhEPO中唾液酸含量，与间苯二酚测定法测定结果比较差异无统计学意义(P = 0.7488)。 结论 本研究建立了rhEPO中唾液酸含量测定的HPAEC-PAD方法，该方法线性、重复性、稳定性良好，适用于rhEPO的唾液酸含量的常规测定。

    [关键词] 高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法；重组人促红素；唾液酸；含量

    [中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2018)09(c)-0102-04

    [Abstract] Objective To develop a high-performance anion-exchange chromatography-pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD) method to determine the content of sialic acid in recombinant human erythropoietin (rhEPO). Methods The rhEPO samples were prepared by changing rhEPO bulks to 5 mmol/L phosphate buffer (pH 7.0)， and adjusted to 0.33 mg/mL. Taking 20 μL sample solution ......