吴晓毅 张可一 张 睿 王昌海

    首都医科大学中医药学院，北京 100069

    中药雷公藤为雷公藤Tripterygium Wilfordii Hook.f.3～4年生根的去皮木质部，临床上可用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾病等自身免疫性疾病[1]，其所含的萜类成分是其发挥生物活性的物质基础[2]。随着药理研究深入，雷公藤甲素和雷公藤红素等萜类成分还被发现具有显著的抗肿瘤活性[3-5]。然而，受限于植物雷公藤生长周期长、萜类成分含量低及药材资源单一等因素[6-7]，雷公藤萜类活性成分的供需关系严重失衡。因此，结合植物组织培养技术，提取雷公藤萜类成分具有较高的现实意义，但目前少见雷公藤悬浮细胞萜类成分提取工艺的研究。本研究以二萜类成分雷公藤甲素和雷酚内酯，以及三萜类成分雷公藤红素含量的综合评分为指标，采用正交试验优化雷公藤悬浮细胞总萜类物质的提取工艺，以期得到简单、经济、科学的提取工艺，为雷公藤萜类活性成分的获取及后续研发提供实验依据和数据支持。

    1 仪器与试剂

    雷公藤悬浮细胞经首都医科大学中药资源与分子生药学实验室建立培养体系及继代培养；雷公藤甲素(成都PUSH生物科技公司，批号：T0120025)；雷酚内酯(上海源叶生物科技有限公司，批号：P07S8F43375)；雷公藤红素(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-14092610)；甲硝唑(中国食品药品检定研究院，批号：J7ZH-1VA9)作为内标物质。甲醇(Thermo Fisher Chemical，批号：C-18419，色谱纯)；乙腈(Thermo Fisher Chemical，批号：L-17369，色谱纯)；甲酸(天津市福晨化学试剂厂，批号：20150807，分析纯)；娃哈哈纯净水(娃哈哈集团有限公司)。

    Agilent 1290/6490液相-串联质谱联用仪；1-14型台式离心机(Sigma 公司)；BSA32025 型(d=0.01 g)、BT25S 型(d=0.01 mg)电子天平(Sartorius公司)；KQ5200DV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

    2 方法与结果

    2.1 萜类成分含量测定

    2.1.1 超高液相-串联质谱(UPLC-MS)条件 超高液相色谱条件：Waters HSS T3色谱柱 (2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；流动相为 0.1%甲酸-水(A)-乙腈(B)梯度洗脱：0～2 min 60%A ......