刘岩 洪凡 王朋

    [摘要] 目的 探討丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在硫氧还蛋白过氧化物酶1(Prx-1)抗硅沉着病肌成纤维细胞转化过程中的作用。 方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(生理盐水)、模型组[二氧化硅(SiO2)]、转染对照组(SiO2+慢病毒载体)和Prx-1转染组(SiO2+Prx-1慢病毒)。生理盐水、SiO2及慢病毒均经支气管灌注。造模后，小鼠常规饲养12周。采用免疫组化法和免疫荧光法分别检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达。Western blot法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原、Prx-1、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(P-p38)、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)表达。 结果 模型组和转染对照组可见矽结节和肺间质纤维化，但Prx-1转染组的上述病变减轻。模型组和转染对照组Prx-1表达无区别，但Prx-1转染组较模型组Prx-1表达增高。与对照组比较，其余各组肺组织α-SMA、8-OHdG、Ⅰ型及Ⅲ型胶原、p-ERK1/2、p-P38、p-JNK表达增多；与模型组和转染对照组比较，Prx-1转染组的上述指标表达减少，差异均有统计学意义(P 25%～50%(2分)，>50%～75%(3分)，>75%(4分)。染色强度评分：无着色(0分)，浅棕黄色(1分)，棕黄色(2分)，棕褐色(3分)。阳性细胞比例和染色强度的乘积为α-SMA染色评分[5]。

    1.6 免疫荧光法检测8-OHdG水平

    肺组织切片水化、修复及封闭后，8-OHdG Ⅰ抗4℃孵育过夜；次日Ⅱ抗避光室温孵育、封片。荧光显微镜下每张切片随机选取5个高倍视野，Image-Pro Plus 6.0软件检测积分光密度值(IOD)，以平均值为8-OHdG表达水平。

    1.7 免疫印迹法检测Prx-1、p-ERK1/2、p-JNK、P-p38及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平

    右肺组织经裂解、离心后收集上清 ......